myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學的生物技術公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們(men) 在高通量聚合酶設計方麵的專(zhuan) 業(ye) 知識，我們(men) 為(wei) 您的應用定製酶。
myPOLS Biotec正在開發新一代的聚合酶
用於(yu) 和可靠的應用，例如個(ge) 性化醫療，病原體(ti) 檢測，和RNA診斷，法醫學等等。
我們(men) 的研發活動包括：
後但並非不重要：我們(men) 所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內(nei) 部生產(chan) 的，並經過常規測試，符合高質量標準。
Article | Product | Size |
#7101S | VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer) | 100 reactions à 25 µl, 1 x 1.25 ml |
#7101M | VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer) | 500 reactions à 25 µl, 5 x 1.25 ml |
該混合物專(zhuan) 門針對直接從(cong) 電池應用進行了優(you) 化。
省略耗時且昂貴的RNA純化。VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix使您能夠直接從(cong) 細胞懸液或細胞裂解液中定量和檢測RNA，無需純化步驟。隻需將細胞分離，將細胞懸浮液直接添加到RT-PCR反應混合物中，放入實時儀(yi) 器中，然後啟動。
任選地，使用裂解緩衝(chong) 液直接在孔或燒瓶中裂解細胞，簡單地旋轉並將上清液直接加入到RT-PCR混合物中。 - 準備好了。
裂解物也可以冷凍並儲(chu) 存在-20℃。
應用
VolcanoCell2G可以直接從(cong) 細胞中進行靈敏的RNA檢測：
一個(ge) ） |
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b） |
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圖1. 直接來自細胞RT-qPCR的0步驟 a）直接來自細胞RT-qPCR的0步驟的工作流程比2步驟標準RT-qPCR更容易和更快。b）從(cong) Lund人中腦（LUHMES）細胞中檢測到GAPDH mRNA，其根據VolcanoCell2G方案（包括單獨的裂解緩衝(chong) 液）重懸浮。 |
反應設置
零件 | 卷 | 終濃度 |
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix | 12.5μl | 1X |
引物前移（10μM）* | 1μl | 0.4μM（0.05-1μM） |
引物反向（10μM）* | 1μl | 0.4μM（0.05-1μM） |
探針（10μM） | 1μl | 0.4μM（0.05-1μM） |
模板**： 細胞懸浮液（無核酸酶水）*** 要麽(me) 細胞裂解液（在1x裂解緩衝(chong) 液中）*** |
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不含核酸酶的水 | 總反應體(ti) 積高達25μl |
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將所有組件保存在冰上。
在使用前仔細旋轉並混合所有溶液。
*請注意，Volcano RT-PCR混合物是從(cong) 和RNA模板擴增的，因此必須使用僅(jin) 與(yu) 外顯子 - 外顯子連接結合的RNA選擇性引物。
**建議的細胞數是懸浮在無核酸酶水或1x VolcanoCell2G裂解緩衝(chong) 液中的10-10,000個(ge) 細胞。細胞懸浮液應按照隨附手冊(ce) 的“方法”部分的建議進行新鮮製備。
***細胞培養(yang) 的模板可直接通過在無核酸酶水中稀釋細胞沉澱（產(chan) 品手冊(ce) 的METHODS部分中的方案1）或通過用1x VolcanoCell2G裂解緩衝(chong) 液裂解孔或管中的細胞來製備（方案2）在產(chan) 品手冊(ce) 的METHODS部分中，當需要從(cong) 不同的孔（例如：在微量滴定板上）製備RT-PCR反應時，這對於(yu) 高通量測定可能更有用。
典型的0步RT-PCR方案（不需要等溫逆轉錄步驟）
步 | 溫度 | 時間 |
初始變性 | 95℃ | 3分鍾 |
變性 | 95℃ | 15秒 |
退火/延伸* | 55-75℃下 | 60秒（25-40周期） |
保持 | <10℃ | 保持 |
*通常，退火溫度比所用引物的計算熔融溫度低約3-5℃。通過運行溫度梯度理想地建立新的PCR，以便找到每個(ge) 引物對的宜退火/延伸溫度。還可以應用三步協議，具有單獨的退火和延伸步驟。
該試劑盒包含一種工程化，極熱穩定的逆轉錄酶和組合的聚合酶，包括一個(ge) 特別優(you) 化的緩衝(chong) 係統，隻需要少量細胞（100到10,000個(ge) 細胞）。套件中還包含單獨的裂解緩衝(chong) 液。
所包含的Volcano2G 聚合酶通過多代定向人工進化而設計，並且在95℃下的半衰期> 40分鍾。它直接從(cong) 細胞懸浮液或裂解物中促進“零步”RT-PCR，無需等溫逆轉錄步驟。
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix包含所有標準實時循環儀(yi) 器中成功可靠的RT-PCR所需的所有組分，並且與(yu) 常見的RT-PCR檢測方法兼容，如熒光實時PCR染料或熒光探針。
推薦的擴增子大小應在60-300 bp之間。
請注意，必須使用跨越外顯子 - 外顯子連接的引物，以限製僅(jin) 對mRNA靶標的擴增。
通過避免昂貴，耗時的細胞裂解或RNA純化，VolcanoCell試劑盒是高通量應用，RNAi敲除或基因表達實驗的理想選擇。預先準備好的2x混合物可確保可重複的RT-PCR結果，顯著縮短設置時間和移液錯誤的風險。隻需添加引物和模板。用包含的裂解緩衝(chong) 液可以容易地製備細胞裂解物。但是，擴增子的大小宜在60-300 bp之間！
VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix含有工程聚合酶，在具有dNTP的應用優(you) 化緩衝(chong) 係統中具有逆轉錄活性。還包括單獨的裂解緩衝(chong) 液。
RT-PCR活性：測試VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix的成功RT-PCR性能。在實時PCR循環儀(yi) 中從(cong) 人總RNA提取物擴增151bp片段（HPRT1 mRNA），並將其顯示為(wei) 單一擴增產(chan) 物。
聚合酶活性：已經使用人工模板和引物監測Volcano2G聚合酶活性並將其調整為(wei) 特定的聚合酶活性。
通過蛋白質特異性染色確定酶濃度。有關(guan) 批次特定濃度，請通過info@mypols.de查詢更多信息。
本產(chan) 品采用冷藏包裝。請在抵達-20°C時存放產(chan) 品。通過以等分試樣存儲(chu) 來小化凍融循環的次數。對於(yu) 日常使用，我們(men) 建議將等分試樣保持在4°C。
Chovancova，P.，Merk，V.，Marx，A.，Leist，M.，Kranaster，R。（2017）反向轉錄定量PCR直接來自沒有RNA提取且沒有等溫逆轉錄的細胞：'零步'RT-qPCR協議。Biol Methods Protoc（2017）2（1）：bpx008。doi：https：//doi.org/10.1093/biomethods/bpx008
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Kranaster，R.，Drum，M.，Engel，N.，Weidmann，M.，Hufert，FT和Marx，A。（2010），一步RNA病原體(ti) 檢測，具有逆轉錄酶活性的突變熱穩定Thermus aquaticus 聚合酶。Biotechnology Journal，5：224-231。DOI：10.1002 / biot.200900200。
貨號 | 品名 | 規格 | 品牌 |
8100S | Volcano2G 聚合酶 | 250 U，5U /μl，50μl | mypols |
8100M | Volcano2G 聚合酶 | 1000U，5U /μl，200μl | mypols |
6101S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6101M | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 500 reactions á 25 µl | mypols |
5 x 1.25 ml | mypols | ||
6201S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6301S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6401S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
7101S | VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer) | 100 reactions à 25 µl, 1 x 1.25 ml | mypols |
7101M | VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer) | 500 reactions à 25 µl, 5 x 1.25 ml | mypols |
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