TGR Biosesciences Pty Ltd（TGR）是一家位於(yu) 澳大利亞(ya) 阿德萊德的私營公司。TGR成立於(yu) 2001年，致力於(yu) 為(wei) 基於(yu) 細胞的研究應用提供創新解決(jue) 方案。我們(men) 的科學家擁有細胞生物學，生物化學和免疫測定設計方麵的專(zhuan) 業(ye) 知識，並開發出高質量的產(chan) 品和服務，這些產(chan) 品和服務已成功應用於(yu) 世界各地的藥物發現計劃。
TGR在其研發方麵投入了大量資金，我們(men) 通過不斷提供新的細胞檢測方法來支持客戶的研究工作，以檢測疾病所依賴的細胞過程。TGR致力於(yu) 營造持續學習(xi) 和改進的氛圍，以及高質量的技術支持，為(wei) 我們(men) 的客戶提供性能的產(chan) 品。
為(wei) 此，TGR憑借其獲得專(zhuan) 項的CaptSure™技術為(wei) 其核心產(chan) 品奠定了基礎。這種創新的抗體(ti) 固定係統提供了更快速，更簡單的免疫測定，以及顯著降低製造成本的好處。此外，我們(men) 開發了CaptSure™Multiplex，用於(yu) 分析單個(ge) 樣品中的多個(ge) 目標。除了在自己的產(chan) 品中使用CaptSure™之外，TGR還與(yu) 其他公司合作，根據許可安排訪問該技術。
我們(men) 的旗艦免疫檢測係列SureFire®是一係列用於(yu) 分析細胞磷蛋白的檢測試劑盒，由我們(men) 位於(yu) 阿德萊德的工廠生產(chan) 。SureFire和SureFire Ultra試劑盒通過PerkinElmer，Inc。（美國）分銷，PerkinElmer，Inc。是實驗室試劑的市場領先者。SureFire和SureFire Ultra檢測器目前提供100多種SureFire試劑盒，可提供的工具箱，用於(yu) 以均質形式測量內(nei) 源性信號蛋白。
TGR的ELISAONE™是一種高靈敏度的免疫分析技術，無需標準ELISA應用所需的所有處理步驟即可提供快速結果。ELISAONE還為(wei) 該平台帶來了靈活性，允許用戶使用標準讀板器在單個(ge) 96孔板上測量多個(ge) 靶標。ELISAONE代表ELISA技術的下一代產(chan) 品，現已通過我們(men) 的分銷合作夥(huo) 伴在美國和加拿大銷售。
與(yu) PerkinElmer合作，我們(men) 自豪地推出AlphaSureFire®Ultra™ Multiplex檢測產(chan) 品組合，這是僅(jin) 可用的磷脂蛋白多路檢測平台，具有真正的同質性和高通量。雖然初的多重測定引入（MPSU試劑盒）僅(jin) 包括用於(yu) 測量磷酸化和總ERK或AKT蛋白的幾個(ge) 試劑盒，但是多重化試劑組的新添加允許從(cong) 銪和一組銪中選擇單個(ge) 磷酸化靶標。基於(yu) 鋱的單獨試劑並根據需要組合。這種拾取和包裝功能允許科學家選擇感興(xing) 趣的雙重目標，以便在實驗室中輕鬆實施。
Alpha SureFire Ultra Multiplex檢測分為(wei) 兩(liang) 類（1）Multiplex SureFire Ultra（MPSU）試劑盒和（2）Terbium SureFire Ultra（TBSU）試劑盒。MPSU試劑盒是用於(yu) 磷酸化和*檢測相同靶標的完整試劑盒，而TBSU試劑盒測量單個(ge) 磷蛋白靶標，並且旨在與(yu) 標準AlphaLISA SureFire Ultra試劑盒（ALSU）組合以評估第二個(ge) 靶標。TBSU試劑盒允許在測定列表中對任何兩(liang) 種磷蛋白靶標進行拾取和包裝組合，提供兩(liang) 種獨立靶標的測量，具有大的選擇靈活性。TBSU試劑盒將通過鋱（Tb）受體(ti) 珠報告目標，而ALSU試劑盒通過銪（Eu）AlphaLISA受體(ti) 珠報告。
阿爾法 神火 ® 超 ™多重磷酸+總測定試劑盒和磷酸+磷酸測定試劑盒（剛剛發布）允許快速，靈敏，和定量地檢測從(cong) 細胞中磷酸化的，具有相同的蛋白質或總量的測量組合第二種磷蛋白。該Alpha Multiplex測量在相同的測定板孔中從(cong) 單個(ge) 細胞裂解物樣品中進行，並且通過使用兩(liang) 種類型的Alpha受體(ti) 珠實現，所述Alpha受體(ti) 珠在不同波長（545nm和615nm）發射。
如下所示，兩(liang) 種不同的Alpha受體(ti) 珠通過與(yu) 特異性測定抗體(ti) 的結合報告它們(men) 與(yu) 不同抗原的結合。
單個(ge) 目標 - Phospho + Total Assay試劑盒（MPSU試劑盒）
Alpha 615（銪）受體(ti) 珠與(yu) 靶蛋白上磷酸化位點的抗體(ti) 直接綴合。Alpha 545（鋱）受體(ti) 珠子塗有Capt Sure™ 試劑，該試劑結合Capt Sure 標記的抗總靶蛋白抗體(ti) 。Alpha供體(ti) 珠結合生物素化的抗總靶蛋白抗體(ti) 。
雙靶分析試劑盒（將ALSU試劑盒與(yu) TBSU試劑盒結合使用）
ALSU試劑盒中的Alpha 615（銪）受體(ti) 珠與(yu) Capt Sure TM 試劑抗體(ti) 綴合至靶蛋白上的位點。TBSU試劑盒中的Alpha 545（鋱）受體(ti) 珠用新開發的Capt Sure2試劑抗體(ti) 包被，該抗體(ti) 結合 第二靶蛋白的Capt Sure2標記的抗靶抗體(ti) 。Alpha供體(ti) 珠子結合靶蛋白質1和2的兩(liang) 種生物素化抗體(ti) 。
在存在靶蛋白的情況下，抗體(ti) 使供體(ti) 和受體(ti) 珠子緊密接近，使得能夠通過具有Alpha功能的讀板器照射供體(ti) 珠子時產(chan) 生α信號。光發射量與(yu) 樣品中存在的目標蛋白質的量成正比。
Alpha技術消除了對費力技術的需求，例如Western印跡或常規ELISA。它是一種無需洗滌步驟的均相分析，結合較短的孵育時間和出色的重現性（較低的CV％），非常適合機器人自動化。
該測定法使用基於(yu) 珠子的Alpha技術，並且需要能夠讀取雙發射波長的Alpha技術兼容的讀板器。
測量磷酸和總蛋白質目標：
用於(yu) 測量磷酸+總ERK和磷酸+總AKT的MPSU試劑盒現已上市。這些試劑盒包含進行測定的所有試劑。
兩(liang) 種磷蛋白靶標的測量：
將ALSU套件與(yu) TBSU套件組合使用
ALSU試劑盒和TBSU試劑盒分別購買(mai) 特定的磷酸化靶標，並結合測量所需的duoplex組合。TBSU試劑盒手冊(ce) 中提供了試劑盒組合的方案。
因此，可以選擇超過900種可能的雙磷蛋白組合用於(yu) 該靈活係統的測量。這在下圖中示意性地示出。
請聯係PerkinElmer獲取化驗盒詳細信息，AlphaPlex讀數的讀板優(you) 化以及當前套件組合的完整詳細信息。
資源
示例數據 - MPSU套件
同時測量每個(ge) 孔中的p-AKT（Ser473）和總AKT
將MCF-7細胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中鋪板過夜。然後用MEM + 1％FBS中不同濃度的渥曼青黴素處理細胞2小時，然後用2.5mg / mL胰島素刺激30分鍾（每種條件n = 3）。將每個(ge) 孔在100mL SureFire Ultra 裂解緩衝(chong) 液中裂解，並使用Alpha SureFire Ultra Multiplex試劑盒同時測定10μL等分試樣的每種裂解物的p-AKT 1/2/3（Ser473）和總AKT1 。
同時測量每個(ge) 孔中的p-ERK和總ERK
將A431細胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中鋪板過夜。然後將細胞血清饑餓2小時，然後用不同濃度的EGF刺激10分鍾（每種條件n = 3）。將每個(ge) 孔在100mL SureFire Ultra 裂解緩衝(chong) 液中裂解，並使用Alpha SureFire Ultra Multiplex試劑盒同時測定10μL等分試樣的每種裂解物的p-ERK和總ERK 。
示例數據 - 將ALSU套件與(yu) TBSU套件組合使用
雙磷蛋白檢測
用抑製劑處理後A431細胞中MEK1和ERK磷酸化的多重分析。 在用抑製劑處理然後刺激後，使用標準ALSU測定試劑盒測量磷酸化MEK1的水平，同時使用TBSU測定試劑盒測量磷酸化ERK水平。
MCF-7細胞中蛋白質磷酸化的多重分析。用mTOR抑製劑雷帕黴素處理細胞，然後用胰島素刺激。通過ALSU和通過TBSU測量的p-AKT 1/2/3（Ser473）水平測量p-p70S6k（Thr389）的水平。
HeLa細胞蛋白磷酸化多重分析及總Cofiin標準化。
用EGF受體(ti) 抑製劑AG1478預處理或不用EGF處理HeLa細胞。除去培養(yang) 基，用1X SureFire Ultra裂解緩衝(chong) 液裂解細胞。通過將用於(yu) p-ERK 的AlphaLISA SureFire Ultra（ALSU）測定試劑盒和用於(yu) Total Cofilin 的Terbium SureFire Ultra（TBSU）測定試劑盒組合製備多重受體(ti) 混合物。
已經開發出Total Cofilin TBSU試劑盒，以允許使用ALSU試劑盒測量的所有磷蛋白靶標分析的duoplexed標準化。
TBSU檢測試劑盒清單
AlphaScreen SureFire STAT3 (p-Tyr705) Assay Kit
Phospho-SYK (Tyr525/526) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
Phospho-SMAD3 (Ser423/425) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
Phospho-p70 S6K (Thr389) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
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