Celltechgen CTG-MGN4766說明書

Celltechgen CTG-MGN4766說明書(shu)

Screening Kit

• Model: CTG-MGN4766

細節：

- 篩選套件

貨號：CTG-MGN4766

試劑盒組分：

2毫升 - 磁珠與(yu) 單克隆抗體(ti) 結合 - 。

200μl-單克隆抗體(ti) ，R-PE共軛（用於(yu) 檢測）

描述

該試劑盒用於(yu) 使用磁珠磁性標記來消耗 - ⁺細胞。細胞用 - 磁珠標記並施加到磁柱上，收集流過部分中的耗盡細胞用於(yu) 進一步實驗。篩選步驟可在細胞擴增後再次進行。

目標特征

符號： -

基因編號：729816

Uniprot條目：Q04683

蛋白質名稱：CXC趨化因子受體(ti) 5型（CXC-R5）（CXCR-5）（伯基特淋巴瘤受體(ti) 1同源物）（CD抗原CD185）Mus musculus（Mouse）

目標功能

容量        

1 X 10 ^9個(ge) 細胞

公式  

所有組分均以含有穩定劑和0.05％sodium azide的緩衝(chong) 液供應。

存儲(chu) 和使用      

在2-8°C的溫度下避光保存。不要凍結。到期日期顯示在樣品瓶標簽上。該產(chan) 品僅(jin) 供研究使用，不適用於(yu) 診斷程序。

一般議定書(shu)

提供篩選珠粒以用突變的細胞表麵抗原分離靶細胞或用特異性抗原消耗非靶細胞。篩選程序通過用針對細胞表麵抗原的單克隆抗體(ti) 磁珠間接磁性標記細胞（突變或特異於(yu) 非靶細胞）進行，然後通過柱分離標記的細胞和靶細胞。收集流出部分以進行進一步分析。

1.樣品製備

• 當使用抗凝外周血或血沉棕黃層時，應通過密度梯度離心分離外周血單核細胞（PBMC）。
• 為了在密度梯度分離後除去血小板，將細胞沉澱重懸於緩衝液中，並在20℃下以200×g離心10-15分鍾。小心吸出上清液。重複洗滌步驟。
• 使用組織或裂解的血液時，使用標準方法製備單細胞懸液。
• 死細胞可以非特異性結合磁珠。為了去除死細胞，我們建議使用密度梯度離心或死細胞去除試劑盒。
• 保持細胞冷卻，並使用預先冷卻的溶液。

2.磁性標簽

• 以下給出的磁性標簽卷多可達10個？總細胞。工作時少於10？細胞，使用與指示相同的體積。使用較高的細胞數時，相應地擴大所有試劑體積和總體積。
• 應滴定初級染料綴合的抗體以確定宜染色稀釋度。染色不應該增加陰性群體的熒光強度。

1）     計算細胞數量。

2）     以300×g離心細胞懸浮液10分鍾。*吸出上清液。

3）     每10 ^7個(ge) 總細胞將細胞重懸於(yu) 80μL緩衝(chong) 液中。注意：等分適量的細胞用於(yu) 抗體(ti) -R-PE標記和檢測。

4）     每10小時加入20μL抗細胞表麵抗原磁珠。總細胞。

5）充分混合，在2-8℃下孵育15分鍾。

6）每10小時加入1-2 mL緩衝(chong) 液洗滌細胞？將細胞以300×g離心10分鍾。

7）*吸出上清液。

8）重新懸掛10？細胞在500μL緩衝(chong) 液中。注意：對於(yu) 更高的單元格數，請相應地擴大緩衝(chong) 區容量。

9）繼續磁分離。

3.篩選靶細胞

1）    將色譜柱放在合適的分離器的磁場中。

2）    用2 mL緩衝(chong) 液衝(chong) 洗製備色譜柱。

3）    將細胞懸浮液施加到柱上。

4）    收集未標記的細胞，其通過並用2×1mL緩衝(chong) 液洗滌柱。一旦柱貯存器為(wei) 空，則通過連續添加緩衝(chong) 液來執行洗滌步驟。收集總排出物。其含有未標記的預富集漿細胞部分。

5）    通過以300×g離心10分鍾收集流出級分中的靶細胞，小心吸出上清液。

6）    將未接觸的細胞重懸於(yu) 培養(yang) 基或所需的緩衝(chong) 液中用於(yu) 進一步實驗。

7）    等分適當量的細胞用於(yu) 抗體(ti) -R-PE標記和檢測是否有足夠的細胞，否則，在細胞擴增後進行抗體(ti) -R-PE標記和檢測。

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