intronbio IR0441071說明書

intronbio IR0441071說明書(shu)

LiliF™ Canine Coronavirus Ag rapid test kit

犬冠狀病毒診斷試劑盒產(chan) 品信息

背景資料

犬冠狀病毒是冠狀病毒科的一種病毒，它在世界範圍內(nei) 導致狗的高度傳(chuan) 染性腸道疾病。它於(yu) 1971年在德國哨兵犬爆發期間被發現。潛伏期為(wei) 一至三天。這種疾病具有高度傳(chuan) 染性，通過感染犬的糞便傳(chuan) 播，感染犬通常會(hui) 在病毒感染後6至9天內(nei) 排出病毒，但有時會(hui) 感染6個(ge) 月。症狀包括腹瀉，嘔吐和厭食症。診斷是通過檢測糞便中的病毒顆粒。

LiliF CCV Ag快速試劑盒是一種側(ce) 流式免疫色譜分析試劑盒，用於(yu) 快速和定性檢測犬體(ti) 內(nei) 分泌物中的犬冠狀病毒抗原。

原理

有可能的使用

• 檢測犬冠狀病毒

解釋

套件內(nei) 容

犬冠狀病毒百科

犬冠狀病毒為(wei) 單勝RNA病毒，有6～7種多肽，其中4種是糖肽，不含RNA聚合酶及神經氨酸酶。犬冠狀病毒(canine coronavirus，CCV)是1種嚴(yan) 重危害養(yang) 犬業(ye) 、經濟動物養(yang) 殖業(ye) 和野生動物保護的病毒性傳(chuan) 染病病源 ^[1]  。可使犬發生程度不同的胃腸炎症狀，特征有頻繁嘔吐、腹瀉、沉鬱、厭食等症狀。本病一年四季均可發生，以冬季多發，病犬是主要的傳(chuan) 染原，犬可通過呼吸道、消化道、糞便及汙染物傳(chuan) 染。該病一但發生，同窩犬同室犬很難控製均可造成感染。該病經常和犬細小病毒，輪狀病毒及其它胃腸道疾病混合感染。幼犬死亡率較高。

中文學名

犬冠狀病毒

別    稱

Canine coronavirus

界

病毒界

目

網巢病毒目

科

冠狀病毒科

屬

冠狀病毒屬

種

犬冠狀病毒

簡介

犬 冠狀 病 毒 (Caninecoronavi,l~S，CCV)屬 於(yu) 尼 多病 毒 目

犬冠狀病毒

(Nidovirales)、冠 狀 病 毒 科 (Coronaviridae)、冠狀 病 毒 屬 (Coronavirus)、冠 狀 病 毒 I群 。CCV 由 Binn等 (1971)首先從(cong) 腹瀉的德國軍(jun) 犬中分離到的 ，病毒粒 子直 徑為(wei) 60～200nm，呈球 形 ，有囊膜 。核衣殼呈細絲(si) 狀 ．螺旋對稱 ，像其它囊膜病毒一樣。CCV 對熱 、脂溶劑 、非離子去汙劑 、甲醛和氧化劑敏 感 ，對酸穩定 ，在-70℃或 凍幹後 在 4℃下可保存數年 。CCV 可在多種犬和貓的細 胞係中增殖 ，如原代犬腎細胞 ，犬胸腺和皮膚纖維瘤細胞 (A72)，貓肺細胞 (CRFK)等 。

犬冠狀病毒(CCV)基因組為(wei) 一28～ 32 kb大小的單股正鏈RNA,基因在病毒自身RNA聚合酶的存在下、以先導引物轉錄機製進行轉錄,不同的病毒基因組和亞(ya) 基因組翻譯產(chan) 生除病毒依賴RNA的RNA聚合酶以外,還產(chan) 生其它病毒的結構蛋白和非結構蛋白,其中有相對比較保守、參與(yu) 病毒核衣殼形成、介導宿主細胞免疫的核衣殼蛋白(N);在病毒出芽、組裝和成熟中起重要作用的膜蛋白(M);能刺激機體(ti) 產(chan) 生中和抗體(ti) ,且易變異的纖突蛋白(S)，另外S蛋白還決(jue) 定著病毒血清型、感染力,同時通過識別,並與(yu) 病毒宿主細胞受體(ti) 相互作用決(jue) 定病毒感染的宿主範圍;參與(yu) 病毒組裝的小膜蛋白(E)和其它病毒蛋白.CCV還可識別貓氨肽酶N(fAPN)並與(yu) 之相互作用。 ^[2] 

發病特點

該病多發於(yu) 寒冷的冬季 ，傳(chuan) 播迅速，數日內(nei) 常成窩暴發 ；該病的發生雖無品種 、年齡、性別之分 ，但在犬群中流行時 ，通常都是幼犬先發病 ，然後波及其他年齡的犬。幼犬的發病率和致死率均高於(yu) 成年犬。幼犬症狀加劇，嘔吐和腹瀉是該病的主要症狀，成年犬症狀輕微 。該病的臨(lin) 床症狀和流行病學與(yu) 輪狀病毒感染相似 ，而且常與(yu) 輪狀病毒、犬細小病毒等混合感染 ，診斷較為(wei) 困難。從(cong) 動物回歸試驗來看，病毒接種後1d就出現臨(lin) 床症狀。所有攻毒犬撲殺後都有腸以及腸係膜淋巴結病變。但有1隻犬沒有可觀察到的明顯症狀 ，原因可能是該病毒需與(yu) 細菌混合感染才表現出明顯的臨(lin) 床症狀 ^[3]  。

犬冠狀病毒病因

犬冠狀病毒病是由犬冠狀病毒引起的，犬冠狀病毒可感染所有品種和各種年齡的狗（以幼犬受害嚴(yan) 重），使狗產(chan) 生輕重不一的胃腸炎症狀，臨(lin) 床上出現頻繁地嘔吐、腹瀉、沉鬱、厭食，臨(lin) 床症狀消失後14～21天仍可複發，是目前危害狗的一大傳(chuan) 染病。感染途徑是消化道，主要是由於(yu) 接觸了病狗排出的糞便及汙染物所致。病毒在糞便裏存活6～9天，汙染物在水中可保持數天的傳(chuan) 染性。犬冠狀病毒可與(yu) 貓傳(chuan) 染性腹膜炎病毒和豬傳(chuan) 染性胃腸炎病毒的抗血清發生反應，說明三者可能是一組病毒。該病毒對熱、紫外線和一般的化學藥品敏感。

症狀

潛伏期1～8天。本病傳(chuan) 染迅速，數日內(nei) 可蔓延全群。一般先表現嗜睡、衰弱、反複嘔吐，以後糞便由糊狀、半糊狀至水樣，橙色或綠色，含黏液或血液，發燒或不發燒，白細胞減少，迅速脫水，死亡。隨著日齡的增長，死亡率降低。有的病例不表現臨(lin) 床症狀。犬冠狀病毒常和細小病毒一起混合感染，構成犬腹瀉大流行。

治療

采用對症療法，如止吐、止瀉、補液，用抗生素防止繼發感染，立即斷食斷水，冠狀病毒是腸胃病，必須斷食斷水，如果腸胃裏麵有食物和水分，病菌就會(hui) 一直有而且拉稀更頻繁，之後帶到“正規獸(shou) 醫站“輸液消炎和輸營養(yang) 液，之後打血清，一般七天的療程就可以恢複，冠狀的治愈幾率在95%左右（獸(shou) 醫站醫生說的），疫苗對犬冠狀病毒病沒有預防效果。減少發病的措施，就是加強飼養(yang) 管理，嚴(yan) 格執行獸(shou) 醫衛生措施。

貓檢測

介紹

貓傳(chuan) 染性腹膜炎(FIP)是目前導致貓死亡的重要原因之一，從(cong) 3個(ge) 月到3齡貓以及大於(yu) 10齡貓，特別是發生在那些純種貓和其它數量及種類繁多但養(yang) 在一起的家養(yang) 貓。貓冠狀病毒FeCV(Feline enteric Coronavirus)是高度傳(chuan) 染性病毒而且偏好發生在數量及種類繁多而且養(yang) 在一起的家養(yang) 貓。FeCV給貓帶來了極大的危險，FeCV陽性通常被認為(wei) 是FIP的前奏。要控製貓FIP根本的方法就是要做好FeCV的預防和控製。FeCV是廣泛的貓冠狀病毒Feline Coronavirus (FCoV)中的一種，FeCV抗體(ti) 的存在僅(jin) 表示有FeCV病毒存在和/或感染了FIP的可能性。對FeCV抗體(ti) 呈陽性結果也不一定表示貓得到了FeCV病毒和/或感染了FIP，應該要和其它臨(lin) 床症狀結合起來一齊判斷。但陰性結果可說明沒有FeCV病毒和/或感染了FIP。

檢測原理

酶標板的孔中包被有純化的冠狀病毒抗原。從(cong) 金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus提取的蛋白A與(yu) HRP結合成複合物。血清或血漿樣品和蛋白A酶標記物一起在酶標板的孔中孵育。如果貓樣品裏存在FCoV抗體(ti) ，抗體(ti) 將與(yu) 孔中的抗原結合，再與(yu) 蛋白A酶標記物結合。多餘(yu) 的酶標記蛋白A被洗掉，加入發色底物。清晰的藍色表示FCoV抗體(ti) 存在，沒有顏色變化表明沒有FCoV抗體(ti) 。

該試劑盒具有高特異性和靈敏度，操作簡單，30分鍾內(nei) 可以知道結果。試劑盒裏包括陽性質控和陰性質控，僅(jin) 需肉眼通過與(yu) 陰性質控顏色進行比較，就可以準確地判斷樣品裏FCoV抗體(ti) 的存在。

樣品

需1ul血清或血漿，隻能檢測貓的樣品。樣品可在2-8C保存7天，如果需要更長的保存，樣品可保存在-20C。嚴(yan) 重紅細胞溶解或脂溶血會(hui) 產(chan) 生幹擾的顏色，所以盡可能去得到更好質量的樣品。

準備洗滌液

讓洗滌濃縮液達到室溫，輕輕地倒置混勻。用蒸餾水或去離子水稀釋洗滌濃縮液（1份洗滌濃縮液加至9份水中），稀釋後的洗滌液可保存於(yu) 2-7上升℃。

結果

a. 檢測的有效性必須是：陽性質控孔裏的液體(ti) 呈清晰的藍色，而陰性質控孔裏的液體(ti) 保持清澈。

b. 假若樣品孔的顏色變化比陰性質控孔深很多則表明，該動物以前或目前正受到FCoV感染，並且有可能通過排泄物傳(chuan) 播病毒。此時便需要與(yu) 其它的臨(lin) 床數據結合起來以確診FIP。

c. 如果樣品孔裏無顏色變化表明沒有感染FIP疾病。

試劑盒組份

以下內(nei) 容物包含在試劑盒裏：

包被好的酶標板 8x12孔

陽性質控血清 1.5ml

陰性質控血清 7.0ml

蛋白A HRP標記物 5.0ml

TMB 7.0ml

底物緩衝(chong) 液 7.0ml

濃縮洗滌液 100.0ml

注意事項

* 試劑盒使用前恢複至室溫（21-25C）

* 不同樣品使用不同的加樣器頭

* 不要把試劑盒直接暴露在陽光下

* 不要使用過期的試劑或不同試劑盒裏試劑一齊混雜使用

* 嚴(yan) 格按照步驟操作，不適當的洗滌或試劑汙染將產(chan) 生非專(zhuan) 一性的顏色

* 獸(shou) 醫使用

保存和穩定性

將試劑盒和稀釋的洗滌液保存於(yu) 2-7℃，不要冷凍。隻要在適當保存條件下，試劑在有效期內(nei) 是穩定的。

參考資料

• 1.  犬瘟熱一犬冠狀病毒雙重PCR診斷方法的建立及初步應用  ．萬方數據庫[引用日期2019-03-12]
• 2.  犬冠狀病毒分子生物學研究進展  ．萬方數據庫[引用日期2019-03-12]
• 3.  犬冠狀病毒的分離及鑒定  ．維普[引用日期2019-03-12]

學術論文

內(nei) 容來自 

•  胡桂學，高鳳山，夏鹹柱等.    大熊貓犬冠狀病毒的分離與鑒定． 《 畜牧獸醫學報 》 ， 2004
•  
•  喬軍，孟慶齡，夏鹹柱等.    犬瘟熱、犬冠狀病毒聯合RT—PCR檢測方法的建立及應用． 《 西南農業學報 》 ， 2002
•  
•  高鳳山，胡桂學，夏鹹柱等.    聯合PCR診斷大熊貓犬瘟熱和犬冠狀病毒的混合感染． 《 吉林農業大學學報 》 ， 2003
•  
•  胡桂學，高鳳山，夏鹹柱等.    大熊貓犬冠狀病毒的分離與鑒定． 《 吉林省畜牧獸醫學會學術年會 》 ， 2003
•  
•  範誌強，夏鹹柱，武銀蓮等.    檢測犬冠狀病毒中和抗體的方法與應用． 《 中國預防獸醫學報 》 ， 1998