ArcticZymes將利用其在北極海洋中的生物勘探活動，成為(wei) 分子研究和診斷新型冷適應酶商業(ye) 化的。

ArcticZymes 71800-100說明書(shu)

T4 連接酶

• 描述

T4 連接酶是一種依賴ATP和Mg ^2+的 ds連接酶，可催化雙鏈，雙鏈RNA和某些 / RNA雜交中3'-羥基和5'-磷酸末端之間的磷酸二酯鍵的形成。T4 連接酶在平末端和內(nei) 聚末端底物上均具有活性。

T4 連接酶

總覽

T4 連接酶是一種依賴ATP和Mg ^2+的 ds連接酶，可催化雙鏈，雙鏈RNA和某些 / RNA雜交中3'-羥基和5'-磷酸末端之間的磷酸二酯鍵的形成。T4 連接酶在平末端和內(nei) 聚末端底物上均具有活性。

這是T4 連接酶的高質量（商業(ye) 級）版本。T4 連接酶在大腸杆菌中重組產(chan) 生。ArcticZymes的T4 連接酶經過了廣泛的測試，能夠汙染DNase和RNase活性以及殘留的宿主細胞g。

T4 Ligas中的大腸杆菌 g 汙染

圖1：T4 Ligases通常含有大腸杆菌 g。分析了ArcticZymes的T4 連接酶和四種市售的T4 連接酶（5000個單位）是否汙染了大腸杆菌 g。在兩個商業連接酶中檢測到了大腸杆菌 g。使用基於探針的qPCR分析，一式三份進行分析。

性質

單位定義(yi) ：  一個(ge) 單位的定義(yi) 是在總反應體(ti) 積為(wei) 5％的情況下，對λ的2322和2927 bp HindIII片段進行75％連接（5´末端濃度為(wei) 0.12 µM，300 µg / ml）所需的酶量。在16°C下30分鍾內(nei) 於(yu) 50 mM Tris-HCl（pH 7.5），10 mM MgCl _2、1 mM ATP和10 mM DTT中20μl。

一個(ge) Weiss單位約等於(yu) 500 ArcticZymes單位。

滅活：通過在70°C下孵育10分鍾，可以*滅活T4 連接酶。

儲存和穩定性

該酶在提供的存儲(chu) 緩衝(chong) 液中在-20°C穩定1年以上。

該酶可耐受至少四個(ge) 凍融循環（-80°C）而不會(hui) 喪(sang) 失活性。

質量控製

ArcticZymes致力於(yu) 提高產(chan) 品質量。T4 連接酶是在挪威的ISO 13485認證工廠生產(chan) 的。

ds核酸內切酶活性

將10,000 U T4 連接酶與(yu) 超螺旋質粒（1 µg）在37°C下孵育4小時。瓊脂糖凝膠電泳未顯示出封閉的環狀向有切口的的任何轉化。

ss核酸內切酶活性

將10,000 U T4 連接酶與(yu) M13 ss（0.5 µg）在37°C下孵育4小時。瓊脂糖凝膠電泳未顯示任何可見的ss降解跡象。

核酸外切酶活性

將10,000 U T4 連接酶與(yu) ³ H-dATP標記的ds或ss（0.5 µg，500 bp）在37°C 下孵育4小時。對於(yu) 任何一種底物，標記的酸溶放射性均未超過空白測試。

RNase活性

將5000 U T4 連接酶與(yu) 2 kb RNA轉錄物（0.5 µg）在37°C下孵育4小時。瓊脂糖凝膠電泳未發現任何可見的RNA降解跡象。

大腸杆菌 g汙染

在基於(yu) 探針的qPCR分析中分析了5000 U T4 連接酶，檢測了大腸杆菌中的23S核糖體(ti) 亞(ya) 基。無大腸杆菌的g可以檢測（LOD：<3 大腸杆菌基因組拷貝）。