| IL28B RealFast™檢測 |  | 7-200 7-203 |
一。預期用途
IL28B RealFast™檢測是一種快速、準確的實時PCR檢測方法，用於(yu) 檢測
人幹擾素lambda 4（ifnl4）基因/假基因，位於(yu) 白細胞介素28b（il28b）基因上遊。遺傳(chuan)
有助於(yu) 預測丙型肝炎病毒（HCV）感染患者的治療反應，這些患者正在考慮接受聚乙二醇幹擾素/利巴韋林（PEGIFN/RBV）治療。有利tt等位基因的純合攜帶者傾(qing) 向於(yu) 高達3倍
持續病毒學應答（SVR）比∏G等位基因攜帶者。在人類提取液中，定性分析鑒別出
可能與(yu) 高（TT/TT）或低（TT/△G和△G/△G）治療相關(guan) 的IFNL4 TT>ΔG基因型——誘導或自發清除HCV。
參考序列：HGVS:NG U 042193.1:G.1457 U 1458;Delaainsc；NCBI DBSNP:RS368234815。
2.介紹
慢性丙型肝炎病毒感染影響了大約3%的世界人口，是肝硬化、肝癌和肝移植的主要原因。
推薦的pegifn/rbv標準療法的成功與(yu) 否取決(jue) 於(yu) 病毒和宿主因素。患者感染不利
1型或4型hcv的svr低於(yu) 2型或3型hcv感染者。影響治療反應的宿主因素包括年齡、性別
影響抗病毒活性的種族和遺傳(chuan) 多態性。ifnl4 rs368234815 t t>.-g變體(ti) 與(yu) rs12979860 c>t緊密相關(guan) ，
長期治療成功的標誌。幾項研究表明rs368234815是il28b的功能變異
mrna調節，與(yu) rs12979860相比，作為(wei) svr和hcv清除的更好預測因子，尤其是在非洲患者中
祖先。IFNL4基因型TT/TT有利於(yu) HCV患者自發和治療誘導的病毒清除，主要是在那些
感染1型或4型。
三。套件內(nei) 含物100/32 RXN
realfast™2x基因分型混合物1瓶白色瓶蓋1000/320微升
IL28B分析混合物1瓶紫色瓶蓋550/550微升
IL28B TT/TT對照品1瓶綠蓋75/75微升
IL28B∏g/∏g-對照品1瓶紅蓋75/75微升
該試劑盒包含終體(ti) 積為(wei) 20微升的100/32反應試劑
每一個(ge) 。
realfast™2x基因分型混合物包括hotstart taq
優(you) 化緩衝(chong) 體(ti) 係中的dna聚合酶和dntps。IL28B分析混合物由IFNL4基因特異性引物和兩(liang) 個(ge) 等位基因特異性雙標記水解探針組成。
試劑盒中提供了代表il28b tt/tt和∏g/∏g基因型的對照品。
四。儲(chu) 存和穩定性
IL28B RealFast™分析用冷卻塊裝運。到達後，將試劑盒保存在-20°C。或者，將試劑盒保存在2到8°C，以便在
一個(ge) 月。該試劑盒可承受20次冷凍/解凍循環，且無活性損失。避免長時間暴露在強光下。如果存儲(chu) 正確，
試劑盒將保持完整的活性，直到標簽上標明的有效期為(wei) 止。5個(ge) 。產(chan) 品描述
5.1。試驗原理
該試驗基於(yu) 熒光5'核酸酶分析，也稱為(wei) 菲律宾新利网上娱乐man®分析。每個(ge) 反應都包含一對基因特異性引物
它放大了ifnl4基因的110bp片段，以及兩(liang) 個(ge) 雙標記的等位基因特異性水解探針
擴增片段的序列。5’熒光探針和3’-猝滅染料在完整探針上的接近阻止了記者
從(cong) 熒光中。在聚合酶鏈反應的延伸階段，taq dna聚合酶的5'-3'外切酶活性能裂解5'-熒光
雜交探測器的記者。熒光團與(yu) 猝滅染料的物理分離實時產(chan) 生熒光信號，熒光信號與(yu) 累積的pcr產(chan) 物成正比。
在純合tt/tt樣本中，hex標記的tt探針與(yu) 基因片段的互補鏈雜交。強壯的
在hex通道（556nm）中檢測到熒光信號，在fam通道（520nm）中沒有或僅(jin) 檢測到基線信號。反之亦然，在
純合子∏g/∏g樣本fam標記的∏g探針與(yu) 基因片段結合。fam中檢測到強熒光信號
在十六進製通道中沒有或隻有一個(ge) 基線信號。在雜合子樣本中（TT/△G），兩(liang) 個(ge) 探針都與(yu) 擴增子結合，並且
在兩(liang) 個(ge) 通道中生成中間信號。
5.2。實時PCR儀(yi) 器兼容性
IL28B RealFast™分析經驗證可與(yu) AB 7500快速儀(yi) 器一起使用。
該試劑盒與(yu) 能夠記錄FAM和HEX熒光的各種通用實時PCR儀(yi) 器兼容：
使用AB StepOne™時，將被動參考染料設置為(wei) “Rox”！提供的套件不含ROX。用於(yu) 需要高rox的實時pcr儀(yi) 器，用於(yu) 數據的標準化（例如
Biosesystems®儀(yi) 器：StepOne™，7300，7900/7900ht），在2X基因分型混合物中添加終濃度為(wei) 1μm的RoX。
5.3條。分析性能規範
il28b realfast™分析和檢測高度連鎖rs12979860 c>t多態性的參考試劑盒顯示99,4%
84份樣品基因分型結果的一致性。
在168個(ge) 等位基因中，IL28B realfast™分析鑒定出113個(ge) 有利TT和55個(ge) 不利∏G等位基因，而參考試劑盒鑒定出
114個(ge) 有利c等位基因和54個(ge) 不利t等位基因。對一個(ge) 不一致的樣本進行測序後發現，存在∏g等位基因，但不存在
與(yu) 一條染色體(ti) 上的rs12979860 t等位基因相關(guan) 。
IL28B RealFast™檢測的敏感性和特異性分別顯示真陽性和真陰性。
檢測限：0.2ng基因組dna（每次反應）。建議濃度：2至20 ng/μL基因組。6.需要但未提供的材料
帶FAM（520 nm）和HEX（556 nm）過濾器的實時PCR儀(yi) 器，儀(yi) 器兼容的反應容器，一次性無粉末
手套、渦流器、2.0毫升試管的微型離心機、試管架、一套校準的微量移液管（0.5–1000微升）、帶氣溶膠屏障的無菌針頭
過濾器，分子級水，提取係統，冷凍櫃，生物危害廢物容器。
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