上海起發現貨progen PRAAV8說明書(shu)

AAV8滴定ELISA

*的微量滴定板酶免疫分析法可定量檢測完整的AAV8 wt病毒體(ti) ，AAV8重組病毒體(ti) 或人腺相關(guan) 病毒8的已組裝和完整的空衣殼。捕獲抗體(ti) 可檢測未組裝的衣殼蛋白上不存在的構象表位。

ELISA原理：

該測定基於(yu) 夾心ELISA技術，其中將對組裝的AAV衣殼上的構象表位具有特異性的單克隆抗體(ti) （mab）塗在板上，並用於(yu) 從(cong) 樣品中捕獲AAV顆粒。

捕獲的AAV顆粒的檢測過程分為(wei) 兩(liang) 個(ge) 步驟。

1. 生物素偶聯的單克隆抗體與捕獲的AAV顆粒結合。
2. 鏈黴親和素過氧化物酶偶聯物與生物素分子反應。底物的添加導致顯色反應，其與特異性結合的病毒顆粒的量成比例。

AAV定量方法的比較：

每種常用的量化方法各有利弊：

• qPCR已被廣泛使用，但存在一些問題，例如樣品製備，引物設計或PCR效率，這些問題可能導致實驗室間結果之間的高度差異。
• 數字液滴PCR方法克服了qPCR的某些局限性。但是，由於不同的樣品處理方案，實驗室之間仍然可能發生變化。
• 如果使用可靠的參考材料，則斑點印跡是一種簡單且定量的方法。然而，它通常受蛋白質印跡的線性和動態範圍的限製。

考慮到上述技術的實際缺陷，目前常規的夾心ELISA在實驗室間和實驗室間的變異以及易於(yu) 使用方麵似乎是*的。因此，它代表了可靠和可再現的總rAVV衣殼滴度定量的宜格式。

改組/變異的AAV的使用：

改組/突變的AAV載體(ti) 的識別取決(jue) 於(yu) 受改組/突變影響的特定衣殼區域。用於(yu) PROGEN的AAV ELISA的捕獲抗體(ti) 結合特異性的（在某些情況下還定義(yi) 為(wei) 良好的構象表位）。這些表位是由相應的AAV血清型的衣殼組件產(chan) 生的。ELISA可能識別您的改組/突變的AAV載體(ti) 的跡象是抗體(ti) 結合表位的存在。然而，衣殼蛋白的蛋白質序列的變化也可能影響蛋白質的構象，因此，AAV衣殼上呈現的表位的構象。這可能會(hui) 影響抗體(ti) 的結合親(qin) 和力，並影響基於(yu) AAV ELISA試劑盒提供的（非改組）試劑盒對照的效價(jia) 測定。由於(yu) 這些屬性在很大程度上取決(jue) 於(yu) 所執行的特定改組/突變，因此PROGEN無法保證對改組/突變的AAV向量進行成功且的定量。即使改組/突變的AAV衣殼上仍存在抗體(ti) 結合表位，也需要針對您的特定AAV載體(ti) 測試和優(you) 化您的檢測方法。

PROGEN強烈建議您生產(chan) 和校準合適的（改組/突變）試劑盒對照品，以確保使用PROGEN ELISA試劑盒可靠地確定滴定的AAV載體(ti) 的滴度。

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