M3009.0000
產(chan) 品信息“ SNP Pol 聚合酶”
SNP Pol 聚合酶用於(yu) 等位基因的簡單，可靠和快速特異性分化，例如。CRISPR / Cas9點突變，檢測不正確的CRISPR / Cas9產(chan) 品，或驗證測序結果。無論是否存在引物模板複合物不匹配，SNP Pol 聚合酶都能識別高度特異性。錯配（點突變）必須在引物的3'末端。因此，突變等位基因可以與(yu) 野生型等位基因*區分開- 無需測序，因為(wei) 在錯配的情況下聚合酶根本不會(hui) 擴增。
隻需將引物放在假定的點突變上（重要：點突變必須在3'末端），聚合酶將以100％的準確性檢測該區域的錯配：如果與(yu) 引物3'末端互補的堿基在上鏈顯示突變而引物未顯示，則沒有擴增發生-快速100％確定！
因此，SNP Pol 聚合酶可輕鬆，省時且經濟地用於(yu) 篩選點突變。
SNP Pol菲律宾新利网上娱乐 聚合酶變異體(ti) 具有5'-3'核酸酶活性，因此可與(yu) 特異性引物探針（如菲律宾新利网上娱乐man®探針或分子信標）一起使用。
一次性測試模式可享受*。在德國境內(nei) 免運費！試用樣品價(jia) 格將在產(chan) 品正式訂購時退還。
描述
的SNP波爾聚合酶（您好 GH 狄單核苷酸scrimination）是高度選擇性的聚合酶。它是專(zhuan) 為(wei) 需要較高區分率的等位基因特異性區分而設計的，例如等位基因特異性PCR（ASA），等位基因特異性引物延伸（AS-PEX），SNP分析，基因分型或甲基化特異性PCR（MSP）。許多聚合酶可耐受錯配的引物-模板複合物。另一方麵，SNP Pol 聚合酶可以區分這些特異性（高區分度），並且僅(jin) 特異性地提供引物對*匹配的PCR產(chan) 物！Genaxxon SNP Pol和SNP Pol菲律宾新利网上娱乐 聚合酶通過兩(liang) 個(ge) 等位基因之間的等位基因特異性PCR差異高達100％，並且在簡單的qPCR之後，可以清楚地說明存在哪些等位基因。
等位基因特異性PCR可用於(yu) 定量野生型序列庫或背景中的突變率。同樣，可以通過等位基因特異性PCR和SNP Pol 聚合酶驗證由NGS確定的突變頻率。SNP Pol菲律宾新利网上娱乐 聚合酶非常適合用於(yu) 液體(ti) 活檢樣品的分析。有了它，就可以很好地分析和量化癌症突變的存在和頻率。
圖片：應用實例SNP Pol 聚合酶
我們(men) 建議使用短擴增子（約60-200 bp）的引物以獲得良結果。更長的擴增子也是可能的。
對於(yu) 大於(yu) 500 bp的較長擴增子，可能需要添加鎂（+0.5-1.5mM）。
故障排除：
PCR 30個(ge) 循環後無條帶！
缺失或弱帶的優(you) 化程序
-實時PCR方法
-檢查dNTP濃度。這應該在200至300μM之間（在PCR中）。
-增加循環次數（至少35次，宜40次）
測試優(you) 化-
循環數在端點檢測中，循環數30並不總是足以產(chan) 生高度可見的條帶。例如，以少於(yu) 200個(ge) 拷貝為(wei) 基線。因此，應該使用實時PCR運行測試，或者可以使用五個(ge) 並行PCR，其中五個(ge) 是在五個(ge) 不同的循環後從(cong) PCR設備中提取的（以下示例）。
終點檢測：
用SNP Pol 聚合酶並行進行五個(ge) 相同的PCR反應。
分別在20、25、30、35和40個(ge) 循環中，從(cong) 循環儀(yi) 中取出一個(ge) PCR管，後將所有五個(ge) 反應加到瓊脂糖凝膠上。
這樣就可以很容易地看出，對於(yu) 給定的應用（起始材料，靶標，引物），PCR中宜的循環數是多少。
帶細胞裂解物的SNP Pol PCR
動物細胞和大腸杆菌可直接用於(yu) SNP Pol 聚合酶的PCR！不需要單獨的裂解和蛋白酶K消化。
程序PCR方法：
1.每個(ge) PCR方法需要50-500個(ge) 細胞！
2.用引物和緩衝(chong) 液準備PCR混合物，並置於(yu) 冰上！
3.將挑選的菌落直接倒入10-20μL水中（不進行單獨的裂解，不進行蛋白酶K消化），
短暫渦旋（5秒），然後將該細胞懸液直接加入PCR反應中，例如將
10μL的細胞懸液用於(yu) PCR總體(ti) 積接近20μL。2-3分鍾的初始變性時間
就足夠了，如果需要，可以延長至5分鍾。
每個(ge) 反應的大基因組。100份相對較小，但仍然可以使用。
該細胞懸浮液的其餘(yu) 部分也可以冷凍掉以進行進一步測試。
可選：
4.如果可能：進行實時PCR！
SNP Pol 聚合酶（M3009>）或（M3061>）可與(yu) 非特異性熒光染料（例如Genaxxon的Green Dye>或SybrGreen®）一起用於(yu) 實時PCR。當使用特定的PCR探針時，隻能使用SNP Pol菲律宾新利网上娱乐 聚合酶，因為(wei) 隻有這種酶才具有5'-3'核酸外切酶活性。
使用我們(men) 高質量的dNTP套裝（M3015.4100和M3015.0250）或混合物（M3016.1010）>或我們(men) 的標記>以及我們(men) 有利的標準瓊脂糖>，我們(men) 為(wei) 您提供PCR的其他產(chan) 品。
SNP Pol 聚合酶的應用領域
-監測，驗證和檢測點突變
-鑒定正確或錯誤的CRISPR / Cas9產(chan) 品
-驗證/確認測序結果
-定量突變（例如NGS結果）
-通過等位基因檢測SNP特異性擴增（ASA）/等位基因特異性PCR-
亞(ya) 硫酸氫鹽處理過的（CpG甲基化側(ce) ）後的甲基化特異性PCR（MSP）
-HLA基因分型
-微測序
-帶有水解探針的實時PCR-
實時多重PCR
- 線蟲DAMID-SEQ數據。
Sharma R，Ritler D，Meister P.
秀麗(li) 隱杆線蟲發育過程中核組織的腺嘌呤甲基轉移酶鑒定分析工具。創世紀。2016年2月4日。doi：10.1002 / dvg.22925。
-用SNPase 聚合酶進行SNP基因分型的小測序可通過以下步驟進行：
Lovmar L，Fredriksson M，Liljedahl U，Sigurdsson S，SyvänenAC。
通過微測序和微陣列的定量評估揭示了整個(ge) 基因組擴增的準確多重SNP基因型。Nucleic Acids Res。2003; 31：e129 。
-HiDi 聚合酶的等位基因特異性錯配選擇性
鼓M，Kranaster R，Ewald C，Blasczyk R，Marx A（2014）Thermus aquaticus 聚合酶的變體(ti) ，具有在等位基因和甲基化特異性擴增中應用的增加的選擇性。公共科學學報9（5）：e96640。DOI：10.1371 / journal.pone.0096640
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