abbexa abx150357說明書

abbexa abx150357說明書(shu)

脂多糖ELISA試劑盒
目錄號：abx150357
尺寸：96T
範圍：12.35 ng/ml-1000 ng/ml
靈敏度：<5.15 ng/ml
儲(chu) 存：將標準品、檢測試劑A、檢測試劑B和96孔板儲(chu) 存在-20°C下，以及其他試劑盒組件
在4°C時。
用途：用於(yu) 血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yang) 上清液和
其他生物液體(ti) 。
簡介：脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）又稱為(wei) 脂多糖和內(nei) 毒素，是由脂類和內(nei) 毒素組成的大分子
由O抗原、外核和內(nei) 核組成的多糖，由共價(jia) 鍵連接；它們(men) 存在於(yu)
革蘭(lan) 氏陰性菌。
分析原理
該試劑盒基於(yu) 競爭(zheng) 性結合酶聯免疫吸附分析技術。在96孔板上預先包被一種針對脂多糖的抗體(ti) 。在生物素標記的脂多糖和未標記的脂多糖之間啟動競爭(zheng) 性抑製反應
脂多糖特異性的預塗抗體(ti) 。洗去未結合的結合物後，與(yu) 辣根過氧化物酶結合的親(qin) 和素
加入每一個(ge) 微孔板並孵育。加入TMB基質溶液後，隻有含有LPS的孔才會(hui) 產(chan) 生藍色
加入酸性停止液後變成黃色的產(chan) 品。黃色的強度與(yu)
脂多糖在板上的結合量。用分光光度法在450 nm處用微孔板閱讀器測量O.D.吸光度，以及
然後計算LPS的濃度。
套件組件
1。一塊預塗96孔微孔板（12×8孔條）
2。標準：2管
三。標準稀釋液：20毫升
四。衝(chong) 洗緩衝(chong) 液（30倍）：20毫升。稀釋度：1:30
5個(ge) 。稀釋劑A:12毫升
6。稀釋劑B:12毫升
7號。停止溶液：6毫升
8個(ge) 。TMB基質：9ml
9號。檢測試劑A:1管
10個(ge) 。檢測試劑B（100X）：120μl
11號。封板機：4台
12歲。試劑稀釋液：300μl
需要但未提供的材料
1。37°C培養(yang) 箱
2。微板閱讀器（波長：450nm）
三。多通道和單通道移液管及無菌移液管
四。噴射瓶或自動微孔板清洗機
5個(ge) 。ELISA搖床
6。製備標準稀釋液或樣品稀釋液的試管
7號。去離子水或蒸餾水
8個(ge) 。吸水濾紙
9號。100毫升和1升量筒
 

協議
A、 樣品和試劑的製備
一。樣品
收集後立即分離測試樣品，立即分析或在4°C下保存5天。否則，應在-20°C下保存一個(ge) 月，或在-80°C下保存兩(liang) 個(ge) 月，以避免生物活性喪(sang) 失。避免多次凍融循環。
•血清：應將樣本收集到血清分離管中。在4°C或室溫下，使試管在垂直位置靜置一整夜，使血清凝固60分鍾。以約1000×g離心20分鍾。
立即或等分分析血清，並儲(chu) 存在-20°C或-80°C下。
•血漿：使用肝素或EDTA作為(wei) 抗凝劑收集血漿。收集後30分鍾內(nei) ，在1000×g下離心15分鍾。立即測定或等分並儲(chu) 存在-20°C或-80°C下。避免溶血和高膽固醇樣品。
•組織勻漿：組織勻漿的製備將根據組織類型而有所不同——這隻是一個(ge) 例子。
用冰冷的PBS衝(chong) 洗組織，去除多餘(yu) 的血液。均化前稱重。在PBS中，用組織勻漿器將組織細粉碎並勻漿，然後對細胞懸浮液進行超聲處理。將勻漿在5000×g離心5min，收集上清液。立即測定或等分並儲(chu) 存在-20°C下。
•細胞裂解物：用胰蛋白酶分離粘附細胞，離心收集並去除上清液。在冷凍PBS中清洗細胞三次，然後在PBS中重新懸浮細胞。用超聲波裂解細胞4次或在-20℃冷凍，並解凍至室溫3次。在1500×g下，在2-8°C下離心10分鍾，以去除細胞碎片。收集上清液並立即化驗。
•細胞培養(yang) 上清：以約1000×g離心20分鍾以除去沉澱劑。立即分析或等分並儲(chu) 存在-20°C或-80°C下。
•其他生物流體(ti) ：以約1000×g離心20分鍾以去除沉澱劑。立即分析或等分並儲(chu) 存在-20°C或-80°C下。
注：
？緩慢將樣品送至室溫。樣品溶血會(hui) 影響結果。不應使用溶血標本。
？樣品必須稀釋，使預期濃度在試劑盒的範圍內(nei) 。樣品應在0.01 mol/L PBS（PH=7.0-7.2）中稀釋。
？如果本手冊(ce) 的應用中沒有說明樣品，則需要進行初步試驗，以確定試劑盒的有效性。
？建議使用新鮮樣品或近獲得的樣品，以防止可能導致錯誤結果的蛋白質降解和變性。為(wei) 了更好的檢測，強烈建議使用血清而不是血漿。
»采血時始終使用非致熱、無內(nei) 毒素的試管。
2。洗滌緩衝(chong) 液
用蒸餾水將濃洗緩衝(chong) 液稀釋30倍（1/30）（即將20毫升濃洗緩衝(chong) 液加入580毫升蒸餾水中）。
三。標準
將樣品和所有組件置於(yu) 室溫下。用0.5ml標準稀釋液（室溫下保存10min）配製標準品，製成1000ng/ml標準溶液。在進行連續稀釋之前，讓重組標準品靜置10分鍾，輕輕攪拌；避免起泡或氣泡。用333.33 ng/ml、111.11 ng/ml、37.04 ng/ml、12.35 ng/ml標記4支試管。將0.6 ml標準稀釋劑緩衝(chong) 液等分到每支試管中。將0.3毫升1000 ng/ml標準溶液加入第1管中，並充分混合。將0.3毫升從(cong) 一管轉移到第二管，充分混合，以此類推。