ArcticZymes 80200-250附加說明

加熱和運行去除試劑盒

可以預期 RNA 完整性的一些損失。因此，不建議在 qPCR 設置之外使用試劑盒。

根據 qPCR 指導原則設計引物。

確保 RNA 和反應緩衝(chong) 液在混合前冰冷。

HL-dsDNase 消化含有終 Mg2+ 因此，RT 反應中鎂的殘留必須為(wei)

考慮。如果使用 10µl 消化的 RNA，20µl RT 反應中的鎂濃度將增加 1.5 mM。

如果用於(yu) 下遊 c 合成的 RT 試劑盒與(yu) 額外的鎂不相容，則可實施以下步驟：

• 逆轉錄前稀釋 DNase 處理的 RNA

使用較小部分經 DNase 處理的 RNA 進行逆轉錄

Nase 處理（多 50µl）。考慮 Mg2+ 將存在於(yu) 剩餘(yu) RNA 中，這可能影響其長期穩定性。

如果 RNA 的體(ti) 積超過 20µl，可能有利於(yu) 將 HL-dsDNase 的量加倍。

反轉錄前避免將去汙的 RNA 和引物預熱到 60 ℃ 以上。

性質

ArcticZymes 的 Heat&Run g removal kit 預期用於(yu) 從(cong) 高質量 RNA 中去除 g，用於(yu) qPCR。RNA 濃度 > 50 ng/

推薦使用 µl。該試劑盒基於(yu) ArcticZymes 公司的熱不穩定雙鏈特異性 dna 酶（HL-dsdna 酶）。DNase 處理後，HL-dsDNase 很容易被溫度的適度升高 (58 ℃) 滅活。g 去除和逆轉錄可以在同一管中進行，從(cong) 而大限度地減少移液步驟，減少動手時間。

來源

HL-dsDNase 是來自北極蝦的 dsDNase 的突變版本。HL-dsDNase 在非動物宿主（酵母）中重組表達。

試劑盒內容物

80200-50：HL-dsDNase（1 瓶）和 10x 反應緩衝(chong) 液（2 瓶），足以進行 50 次反應。

失效日期

參見標簽。

儲(chu) 存

Store at -20 °C 下儲(chu) 存。建議等分反應緩衝(chong) 液，以避免反複凍融循環。

保持反應緩衝(chong) 液冷卻。

樣品材料

HL-dsDNase 適用於(yu) 任何來源 RNA 的去汙。該試劑盒與(yu) RNase 抑製劑相容。EDTA 和高鹽濃度會(hui) 降低 HL-dsDNase 的活性。

質量控製

檢測試劑盒內(nei) 容物是否存在 RNase。

方案

設置加熱和運行反應，如下所示：

1. 向置於冰上的空試管中加入 1µl HL-dsDNase注：使用與預期用於逆轉錄相同的試管。
2. 每 10µl RNA 加入 1µl 10x 反應緩衝液
3. 加入 8-50µl 您的 RNA

注：如果預期使用同管逆轉錄，確保 HL-dsDNase 反應的總體(ti) 積不超過 RT-kit 的大輸入限值。

1. 37 °C 下孵育 10 min（g 消化）

注：也可在 25 ℃ 孵育 20 min。

1. 在 58 ℃ 下孵育 5 min（HL-dsDNase 滅活）
2. 進行逆轉錄。

注：將您選擇的 RT 試劑直接加入 HL-dsDNase 反應混合物中。

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