agilent PB31 RPE 和 PB32 RPE的區別

agilent PB31 RPE 和 PB32 RPE的區別 藻膽蛋白常見問題解答 (FAQ)

我想在活化或無菌過濾等操作之前對 PB20 APC 的 60% 硫酸銨懸浮液進行脫鹽。我可以將懸浮液稀釋後用離心柱脫鹽嗎？

我們(men) 不建議使用離心脫鹽柱，因為(wei) 它們(men) 的分離度不足以*去除銨離子。我們(men) 建議采用以下任意選項進行脫鹽： 1. 在 PBS 或您選擇的緩衝(chong) 液中透析 APC（每天至少更換幾次緩衝(chong) 液，以確保銨離子*交換）。可以使用標準透析管、商用透析盒，完整 APC 的分子量約為(wei) 100 kDa。 2. 使用 GE 公司的 PD-10 柱等色譜柱進行脫鹽。在這種情況下，在裝載至色譜柱之前 APC 應進行離心（和丟(diu) 棄無色上清液），沉澱團塊應*複溶於(yu) PBS（或您選擇的緩衝(chong) 液）中。如果時間是考察因素之一，此步驟也可用於(yu) 快速啟動上麵的透析選項。為(wei) 了確保脫鹽*，建議樣品體(ti) 積不要超過柱床體(ti) 積的 10%。

我有一款購自 Turner Designs 的熒光計，專(zhuan) 門用於(yu) 以 PB11 C-藻藍蛋白作為(wei) 校準標樣的應用。安捷倫(lun) 有相關(guan) 校準方案嗎？

我們(men) 沒有使用 PB11 進行儀(yi) 器校準的特定方案，但 Turner Designs 公司應該能夠為(wei) 您提供幫助。不過，我們(men) 可以為(wei) 您提供一些操作建議。我們(men) 建議您僅(jin) 從(cong) 樣品瓶中取用您所需量的樣品，其餘(yu) 未稀釋的部分在 4 °C 下避光儲(chu) 存於(yu) 原硫酸銨製劑緩衝(chong) 液中。雖然 PB11 可以在水中稀釋，但這並不是良好的儲(chu) 存方式。 PB11 經水或 PBS 稀釋後不太穩定，因此每次隻能稀釋一次校準所需的量，即每次校準都應使用新鮮配製的 PB11 稀釋液。因為(wei) 稀釋液將由新鮮物料製成，所以可以使用水。由於(yu) PB11 的濃度很小，因此在稀釋前無需為(wei) 去除硫酸銨對物料進行透析。需要重點注意的是，在將任何物料從(cong) 原裝容器中移出並進行稀釋之前，必須充分混合 Pb11。我們(men) 的 PB11 的濃度規格為(wei) ≥ 10 mg/mL，但通常我們(men) 供應的濃度更高。濃度值列在分析證書(shu) 上。

安捷倫(lun) 有關(guan) 於(yu) PB40-PerCP 與(yu) 抗體(ti) 或其他蛋白質偶聯的方案嗎？

PB40-PerCP 可以與(yu) 蛋白質偶聯，但必須用 SMCC 進行活化。緩衝(chong) 液將 PerCP 交換到 PBS 中，並用 NHS-SMCC 活化（比例可能需要優(you) 化）。由於(yu) 活化 PerCP 的保質期很短，我們(men) 建議您隻活化您所需量的偶聯物料。因此，我們(men) 不提供 PerCP 偶聯試劑盒，或像 RPE 和 APC 一樣將活化的 PerCP 作為(wei) 獨立產(chan) 品提供。抗體(ti) 偶聯的一個(ge) 合理起點為(wei) 1 mg SMCC 活化的 PerCP:1 mg Ab，但這需要針對您的特定目標進行優(you) 化。對於(yu) 一般的偶聯方案，我們(men) 的 PJ31K RPE 偶聯試劑盒對所用的步驟和試劑進行了詳細介紹。一些單克隆抗體(ti) 可能在 DTT 還原後沉澱，例如 PJ31K 方案。使用 SPDP/TCEP 的替代方案可能適用於(yu) 在 DTT 中表現不佳的抗體(ti) ，我們(men) 的替代偶聯方案技術簡報中提供了相關(guan) 信息。

安捷倫(lun) 網站以往的產(chan) 品 PB31 RPE 和 PB32 RPE+ 有什麽(me) 區別？

PB32 與(yu) PB31 是由相同的類紫菜藻菌株產(chan) 生的，但前者經過額外的純化步驟去除遊離的 RPE 亞(ya) 基。我們(men) 認為(wei) PB32 是一種合適的 PB31 替代物，在偶聯應用中可能提供更好的結果。但是，如果您更傾(qing) 向於(yu) 使用 PB31，

如何測量 RPE 的濃度？

如何測量 RPE 的濃度？

我們(men) 在 566 nm 處測量 RPE 的濃度。將 λmax (566 nm) 處的吸光度乘以 10，再除以消光係數 (82)，得到 RPE 的濃度 (mg/mL)。 RPE 濃度 (mg/mL) = （A566 測量值 × 10）/82 我們(men) 將 λmax 處的消光係數作為(wei) E1%，即 1% 溶液 (10 mg/mL) 在 1 cm 光程的比色皿中的吸光度。然而，許多我想在活化或無菌過濾等操作之前對 PB20 APC 的 60% 硫酸銨懸浮液進行脫鹽。我可以將懸浮液稀釋後用離心柱脫鹽嗎？我有一款購自 Turner Designs 的熒光計，專(zhuan) 門用於(yu) 以 PB11 C-藻藍蛋白作為(wei) 校準標樣的應用。安捷倫(lun) 有相關(guan) 校準方案嗎？安捷倫(lun) 有關(guan) 於(yu) PB40-PerCP 與(yu) 抗體(ti) 或其他蛋白質偶聯的方案嗎？安捷倫(lun) 網站以往的產(chan) 品 PB31 RPE 和 PB32 RPE+ 有什麽(me) 區別？如何測量 RPE 的濃度？科學家已經習(xi) 慣於(yu) 觀察 1 mg/mL (0.1%) 蛋白質的消光係數。對於(yu) RPE，即為(wei) 1 mg/mL 溶液的 A566 吸光度值 8.2，它的計算公式更為(wei) 簡單： RPE 濃度 (mg/mL) = A566 測量值/8.2 我們(men) 用分光光度法而不是熒光法測量濃度。有關(guan) 計算藻膽蛋白濃度和摩爾濃度的更多信息，請參閱安捷倫(lun) 偶聯評估技術簡報。

我想在活化或無菌過濾等操作之前對 PB32 RPE 的 60% 硫酸銨懸浮液進行脫鹽。我可以將懸浮液稀釋後用離心柱脫鹽嗎？

我們(men) 不建議使用離心脫鹽柱，因為(wei) 它們(men) 的分離度不足以*去除銨離子。我們(men) 建議采用以下任意選項進行脫鹽： 1. 在 PBS 或您選擇的緩衝(chong) 液中透析 RPE（每天至少更換幾次緩衝(chong) 液，以確保銨離子*交換）。可以使用標準透析管、商用透析盒，完整 RPE 的分子量約為(wei) 240 kDa。 2. 使用 GE 公司的 PD-10 柱等色譜柱進行脫鹽。在這種情況下，在裝載至色譜柱之前 RPE 應進行離心（和丟(diu) 棄無色上清液），沉澱團塊應*複溶於(yu) PBS（或您選擇的緩衝(chong) 液）中。如果時間是考察因素之一，此步驟也可用於(yu) 快速啟動上麵的透析選項。為(wei) 了確保脫鹽*，建議樣品體(ti) 積不要超過柱床體(ti) 積的 10%。