Gene Link
提供的材料

儲(chu) 存條件：

接收後儲(chu) 存糖原和線性丙烯酰胺溶液at -20^oC 以及室溫下的所有其他溶液。

檢驗報告和產品質量標準

和 RNA 沉澱溶液是所有分子生物學實驗室的基本要求。Gene Link 使用無核酸酶水製備了一係列常見和流行的溶液，均為(wei) 分子生物學級，也適用於(yu) RNA 沉澱。

使用無核酸酶水製備糖原和線性丙烯酰胺溶液，並通過在 RNA 和 沉澱中使用核酸酶，隨後進行瓊脂糖凝膠電泳來檢測是否存在核酸酶，以確定核酸的完整性和無分解。

在無核酸酶高壓滅菌水中製備 LiCl、醋酸鈉、醋酸鉀和氯化鈉的適當摩爾濃度溶液，製備後再次高壓滅菌。在無核酸酶高壓滅菌水中製備適當摩爾濃度的乙酸銨溶液。檢測所有溶液的 、RNA 和寡核苷酸沉澱。

經認證，所有溶液均不含核酸酶和核酸，並經驗證可用於(yu) 和 RNA 沉澱。需要適當的無核酸酶處理、分配和儲(chu) 存條件。

在每個產品的標簽和隨附的裝箱單上注明製造批號。

產(chan) 品描述和應用

和 RNA 的沉澱

經典的分子生物學程序是乙醇沉澱濃縮 、RNA 和寡核苷酸。變更為(wei) 使用異丙醇。本產(chan) 品手冊(ce) 僅(jin) 限於(yu) 與(yu) 核酸的酒精沉澱相關(guan) 的描述。另一種濃縮 和 RNA 的方法是使用矽膠珠或玻璃纖維過濾器，在離液鹽存在的情況下優(you) 先結合 和 RNA。參見Omni-Clean™該方法詳細信息的產(chan) 品線。Omni-Clean™是從(cong) 極稀溶液中濃縮 和 RNA，從(cong) 凝膠切片中提取 和 RNA 的有效方法。

使用酒精進行 和 RNA 沉澱是基於(yu) 在存在鹽的情況下鹽析的原理，使核酸優(you) 先變得不溶，並通過離心收集沉澱物。該工藝還純化了 和 RNA，留下醇溶性鹽、有機溶劑和洗滌劑。

由於(yu) 磷酸二酯鍵的磷酸基團， 和 RNA 的骨架帶負電荷，因此水合，易溶於(yu) 中性水。加入陽離子鹽和乙醇或異丙醇可破壞水合物外殼，促進帶負電荷的磷酸基團和帶正電荷的離子之間形成離子鍵，有效中和 或 RNA 分子，導致沉澱。

乙醇與異丙醇

乙醇和異丙醇均用於(yu) 核酸的沉澱。乙醇用於(yu) 和

1. -RNA 和異丙醇為 0.6 至 1 體積的 和 RNA 溶液，體積為 3。對於異丙醇，乙醇的終濃度在 60%-80% 和 30%-50% 之間變化。

異丙醇具有所需體(ti) 積較小的優(you) 點，通常用於(yu) 沉澱大量核酸溶液。通常，向 1 體(ti) 積 溶液中加入 0.6 至 1 體(ti) 積的異丙醇。較高的量對較小的 RNA 的片段有用。相比之下，2 體(ti) 積乙醇是 的標準品，2.5 體(ti) 積是 RNA 溶液的標準品。但是，與(yu) 乙醇相比，異丙醇的缺點是共沉澱更多的鹽，揮發性更低，並且風幹緩慢，增加了酒精殘留到終樣品中的風險。

載體/共沉澱劑

通過標準乙醇沉澱法，在 100-200 ng/mL 濃度下， 和 RNA 沉澱相當有效，並且通常在該濃度下也可見沉澱。低於(yu) 100 ng/mL 時通常無法實現定量沉澱，此外，沉澱不可見，因此難以完成乙醇沉澱。

傳(chuan) 統上使用 tRNA 和糖原作為(wei) 載體(ti) 來幫助沉澱和顆粒的可見性。這兩(liang) 種物質均來自生物來源，因此含有痕量核酸，其使用需要廣泛去除核酸和核酸酶。線性聚丙烯酰胺 (LPA) 是一種合成的惰性載體(ti) ，因此不含核酸和核酸酶。

糖原和線性丙烯酰胺 (LPA) 對大多數分子生物學應用的抑製作用均極小，因此可以相當有信心地使用。

鹽

乙醇沉澱中常用的鹽是醋酸鈉、乙酸銨、氯化鈉和氯化鋰。

3M 醋酸鈉 ph5.2-5.5 溶液是大多數實驗室核酸沉澱的標準試劑。下麵列出了常用鹽及一些屬性。

冷卻溫度和時間

經典的冷卻溫度為(wei) -20 ℃10-15 min，當 濃度低於(yu) 100 ng 時，這可能是選，但通常沒有必要，因為(wei) 當 濃度不受限製時，沉澱發生非常迅速。

不同實驗室的沉澱冷卻時間不同，從(cong) -70 ℃、-20 ℃、0 ℃ 或室溫，持續 5 min 至過夜。對於(yu) 低 濃度，可能需要長達 20 min 的離心時間才能有效回收。

在較低溫度下，酒精的粘度大大增加，可能需要離心更長時間才能有效沉澱 。在-70 ℃ 孵育可提高小濃度或少量 的沉澱效率，但這些溶液應在離心前恢複至 0 ℃。

離心速度和時間

一般 12K rpm 離心 5-10 min 足以沉澱 和 RNA。較長的離心時間可有效回收低濃度核酸，但通常無需增加超過 20 min。

幹燥

應注意在複溶前幹燥沉澱的 和 RNA 以*蒸發乙醇或異丙醇。核酸不應過度幹燥，應避免或在觀察到的足以蒸發酒精的較短持續時間內(nei) 進行加熱加速真空。通常將管在工作台上保持打開幾分鍾就足夠了。

RNA 的沉澱

RNA 沉澱通常與(yu) 相似，而應特別考慮無 RNase 處理和所有方法的性能。

選 RNA 複溶和儲(chu) 存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

複溶

參見Gene Link &RNA 重構液[目錄號：40-3000-00]手冊(ce) 。

&RNA 重構液包裝內(nei) 容物

目錄號：40-5014-05 RNA 複溶溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4）；50 mL 目錄號：40-3000-05 DEPC 處理水；50 mL

目錄號：40-3001-05 無核酸酶水（不含 DEPC）；50 mL 目錄號：40-5011-05 TE 緩衝(chong) 液 1X 溶液 pH 7.0；50 mL

載體/共沉澱劑

糖原

糖原溶液 10 mg/mL；目錄號：40-5112-01

使用單價(jia) 鹽和乙醇或異丙醇進行有效的 和 RNA 沉澱取決(jue) 於(yu) 其濃度。濃度低於(yu) 50 ng/mL 時， 和特異性 RNA 沉澱通常無法定量，沉澱不清晰可見，導致回收率不可靠。

添加糖原或線性丙烯酰胺作為(wei) 載體(ti) /共沉澱劑有助於(yu) 定量回收，特別是沉澱的清晰可見性。糖原不會(hui) 幹擾分光光度法讀數、電泳和包括 PCR 在內(nei) 的大多數分子生物學酶應用。

用途：1µL (10µg) 10 mg/mL 糖原溶液足以用於(yu) 500µL 或 RNA 溶液。糖原來源：糖原是一種來源於(yu) 牡蠣的高純度多糖。

規格：分子生物學級。提供的糖原溶液經驗證不含 DNase 和 RNase。糖原溶液可能含有殘餘(yu) 核酸。

線性丙烯酰胺

線性丙烯酰胺溶液（線性聚丙烯酰胺，LPA；5 mg/mL）；目錄號：40-5113-01

使用單價(jia) 鹽和乙醇或異丙醇進行有效的 和 RNA 沉澱取決(jue) 於(yu) 其濃度。濃度低於(yu) 50 ng/mL 時， 和特異性 RNA 沉澱通常無法定量，沉澱不清晰可見，導致回收率不可靠。

添加線性丙烯酰胺作為(wei) 載體(ti) /共沉澱劑有助於(yu) 定量回收，尤其是顆粒的清晰可見性。線性丙烯酰胺不幹擾分光光度法讀數、電泳和包括 PCR 在內(nei) 的大多數分子生物學酶應用。線性丙烯酰胺是合成的，保證不含所有核酸、dna 酶、rna 酶和蛋白酶。線性聚丙烯酰胺 [40-5113-01] 的平均分子量為(wei) 9-13 MDa。

用途：1-2µL (5-10µg) 5 mg/mL 線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液足以用於(yu) 500µL 或 RNA 溶液。線性聚丙烯酰胺顆粒未緊密粘附在微量離心管底部。去除上清液時，小心不要丟(diu) 棄沉澱物。

線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液來源：在無核酸酶分子生物學級水中製備的合成物。

規格：分子生物學級。提供的線性丙烯酰胺 (LPA) 溶液經驗證不含 DNase、RNase、蛋白酶和核酸。線性聚丙烯酰胺 [40-5113-01] 的平均分子量為(wei) 9-13 MDa。

醋酸鈉

3M 醋酸鈉 pH 5.5 &RNA 沉澱溶液；目錄號：40-5132-05

醋酸鈉可沉澱蛋白質，因此，如果溶液含有大量蛋白質，應避免使用。

用途：0.3 M 醋酸鈉終濃度和 2-2.5 體(ti) 積乙醇。

濃度≥20 ng/mL 時 或 RNA 的常規沉澱

1. 添加 1/10^th3 MpH 值醋酸鈉的體積 5.5.
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 () 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 10 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉澱中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風幹顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團塊。
9. 選 RNA 複溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

醋酸鉀

3M 醋酸鉀 pH 5.5 &RNA 沉澱溶液；目錄號：40-5133-50

1. 醋酸鉀在 RNA 沉澱中特別有用，用於無細胞翻譯，因為它避免了鈉離子的加入。
2. 沉澱蛋白質，因此如果溶液含有大量蛋白質，應避免沉澱。
3. 避免與含 SDS 的 和 RNA 溶液一起使用。SDS 的鉀鹽極不溶。

用途：0.3 M 醋酸鉀終濃度和 2-2.5 體(ti) 積乙醇。

濃度≥20 ng/mL 時 或 RNA 的常規沉澱

1. 添加 1/10^th3 M 醋酸鉀 pH 值的體積 5.5.
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 () 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 10 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉澱中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風幹顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團塊。
9. 選 RNA 複溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

氯化鈉

5M 氯化鈉 &RNA 沉澱；目錄號：40-5134-05

1. 無需調節 pH 值。
2. 高洗滌劑含量溶液中的選鹽。SDS 可溶於 70% 乙醇，確保無洗滌劑 沉澱。

用途：0.3 M 氯化鈉終濃度和 2-2.5 體(ti) 積乙醇濃度≥500 ng/mL 時 或 RNA 的常規沉澱

1. 加入 5M 氯化鈉至終濃度 0.3M。
2. 加入 2 體積 100% 乙醇 () 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
3. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
4. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
5. 向沉澱中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
6. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
7. 風幹顆粒 5 min。
8. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸沉澱
9. 選 RNA 複溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

乙酸銨：7.5M 醋酸銨 &RNA 沉澱液；目錄號：40-5135-05

1. 揮發性溶液，請勿高壓滅菌。
2. 高 dNTP 和寡糖含量溶液中的選鹽，因為這些物質仍保留在溶液中。
3. 如果作為銨離子的激酶化抑製多核苷酸激酶，則避免使用。
4. 2.5M 乙酸銨與乙醇沉澱 ，而碳水化合物和 dNTP 保留在溶液中。

用途：2.5 M 乙酸銨終濃度和 2.5 體(ti) 積乙醇用於(yu) RNA 濃度≥20 ng/mL 時 或 RNA 的常規沉澱

1. 加入 0.5 體積的 7.5 M 乙酸銨。渦旋。
2. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min
3. 加入 2 體積 100% 乙醇 () 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
4. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 向沉澱中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
7. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
8. 風幹顆粒 5 min。
9. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸團塊。
10. 選 RNA 複溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

乙酸銨：5M 醋酸銨 &RNA 沉澱液；目錄號：40-5136-05

1. 揮發性溶液，請勿高壓滅菌。
2. 高 dNTP 和寡糖含量溶液中的選鹽，因為這些物質仍保留在溶液中。
3. 如果作為銨離子的激酶化抑製多核苷酸激酶，則避免使用。
4. 2.5M 乙酸銨與乙醇沉澱 ，而碳水化合物和 dNTP 保留在溶液中。

用途：2.5 M 乙酸銨終濃度和 2.5 體(ti) 積乙醇（用於(yu) RNA）

濃度≥20 ng/mL 時 或 RNA 的常規沉澱

1. 加入 1 體積 5 M 乙酸銨。渦旋。
2. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min
3. 加入 2 體積 100% 乙醇 () 或 2.5 體積 100% 乙醇 (RNA)。
4. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 向沉澱中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
7. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
8. 風幹顆粒 5 min。
9. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 中重懸沉澱
10. 選 RNA 複溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

LiCl RNA 沉澱溶液：(7.5M LiCl，50 mM EDTA pH 8.0)；目錄號：40-5131-05

不得用於(yu) 小於(yu) 300 個(ge) 核苷酸的 RNA 的沉澱。

終濃度為(wei) 2.5M 的 LiCl 在不添加乙醇的情況下可有效沉澱大於(yu) 300 個(ge) 核苷酸的 RNA，這種沉澱方法選擇性沉澱 RNA，不能有效沉澱 、蛋白質或碳水化合物 (Barlow et al.,1963)。它是去除 RNA 製劑中翻譯或 c 合成抑製劑的選方法 (Cathala et al.,1983)。同時為(wei) 從(cong) 體(ti) 外轉錄反應中回收 RNA 提供了一種簡單快速的方法。4 ℃、12K rpm 離心 20 min，可定量回收低至 50 ng 的 RNA。

用途：在不添加乙醇或異丙醇的情況下，對 2.5 M 氯化鋰進行終濃縮。濃度≥100 ng/mL 時 RNA 的常規沉澱。

1. 加入 0.5 體積的 7.5 MLiCl。（請勿添加乙醇）
2. 在-20 ℃ 下孵育 30 min。
3. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 15 min。輕輕倒出或吸取上清液。
4. 向沉澱中加入 200µL-20 ℃ 下儲存的 70% 乙醇。渦旋。
5. 在 4 °C 下以 12 Krpm 離心至少 3 min。輕輕倒出或吸取上清液。
6. 風幹顆粒 5 min。
7. 在無核酸酶水或 TE (10 mM Tris pH 7.5，1 mM EDTA) 或 1 mM 檸檬酸鈉 pH 6.4 中重懸團塊。
8. 選 RNA 複溶和儲存溶液（1 mM 檸檬酸鈉，pH 6.4；）[目錄號：40-5014-16]

參考文獻

1. Okayama,H.&Berg,P. (1982)摩爾細胞生物學2、161-170，高效克隆全長 c。
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3. Ausubel,F.A.,Brent,R.,Kingston,R.E.,Moore,D.D.,Seidman,J.G.,Smith,J.A.&Struhl,K. (eds.)（1995 年）當前分子生物學方案，第 15.3.1-4 頁（增刊17）Greene Publishing&Wiley-Interscience,New York.
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5. Gaillard、C 和 F Strauss。“以線性聚丙烯酰胺為載體的 乙醇沉澱。”核酸研究18,no. 2（1990 年 1 月）:378.
6. Barlow,J J,A PMathias,R Williamson,and DB Gammack.“一種定量分離未降解高分子量核糖核酸的簡單方法。”生物化學。生物物理學。共存研究13 (1963): 61-66.
7. Cathala,G 等人“完整、翻譯活性核糖核酸的分離方法。”2 (1983): 329-335.

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