| ProGreen™杆狀病毒基因組載體編碼維多利亞水母綠色熒光蛋白（GFP）圖1。GFP可以監控重組病毒的繁殖，優化培養條件，並通過“末端綠色稀釋”來滴定病毒原種。多角體蛋白位點保留用於在強多角體蛋白啟動子控製下插入靶基因。初，多角體蛋白位點被大腸杆菌 β-半乳糖苷酶基因占據。為了允許插入靶基因，使用Bsu36.I限製性核酸內切酶從杆狀病毒中去除了β-半乳糖苷酶基因，該酶在多角體蛋白啟動子的下遊，β-半乳糖苷酶基因和下遊必需基因ORF 1629中進行切割。 |
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| | 圖1. ProGreen™的示意圖。基因GFP由綠色箭頭指示。多麵體啟動子由黑色三角形表示。 大腸杆菌 β-半乳糖苷酶基因初存在於多角體蛋白位點中。但是，在市售的ProGreen™載體中，它與必需基因的一部分一起被去除，以允許用β-半乳糖苷酶基因替代感興趣的基因（靶基因），更多信息請參考TECHNOLOGY。
ProGreen™可以驅動目標蛋白質的合成速率，該速率接近重組杆狀病毒係統中針對具體目標蛋白質所能達到的大速率，同時可以高水平表達GFP（圖2）。 大腸杆菌β-半乳糖苷酶（β-gal）在多角體蛋白位點中表達為靶蛋白，以便充分比較ProGreen™和常規載體BacPAK6™之間靶蛋白的合成速率。如圖2所示，兩種載體都將靶蛋白（β-gal）表達到大約相同的高水平，而ProGreen™也表達GFP。 |
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| |  | 圖2.感染了基於BacPAK6™和基於ProGreen™的重組杆狀病毒的昆蟲細胞的蛋白質表達譜，這些杆狀病毒在多角體蛋白啟動子的控製下在多角體蛋白位點表達大腸杆菌 β-半乳糖苷酶（β-gal）。 用重組杆狀病毒以每細胞5個噬斑形成單位感染重組夜蛾 Sf9細胞，並在感染後60小時收獲。在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150 mM EDTA，0.5％NP-40中裂解細胞，並將裂解液以30,000g離心15分鍾。β-半乳糖苷酶和GFP高度可溶，幾乎僅在上清液中發現。上清液蛋白在11％SDS-PAGE中分離，並用考馬斯亮蘭染色。 |
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| | 方法。 轉到杆狀病毒教程，以獲取簡單的分步操作說明。有關概念性細節，請參閱技術。如果您已經對這些載體有經驗，則可以使用與BaculoGold™（BD Pharmingen）相同的方法。
推薦的質粒轉移載體。如下圖3所示，大量的質粒與ProGreen™載體兼容，可滿足各種蛋白質表達和純化要求。我們提供可以提供高效信號序列的載體（pAB-bee™，pAB-bee™-8xHis，pAB -bee-FH™質粒轉移載體）以促進分泌蛋白和膜蛋白的表達。靶蛋白可以使用 GST，His，GFP，MBP或雙重His / MBP或FLAG / His標簽表達，或使用pVL1393質粒載體表達而無需標簽。使用pAcAB3載體可以表達多達3種靶蛋白，該載體也與ProGreen™-C1和-C2載體兼容。您也可以使用與BacPAK6™或BaculoGold™載體兼容的任何質粒轉移載體。 |
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| pVL1393，目錄號 ＃B1 | | pAB-GST™，目錄 ＃B5 | | pAB-6xHis™，產品目錄。＃B4 | | pVL-FH，目錄號 ＃B9 | | pAB-6xHis-MBP™，目錄 ＃B7 | | pAB-MBP™，目錄 ＃B6 | | pVL-GFP TM，目錄號。＃B8 | | pAB-bee，目錄號。＃B3 | | pAB-bee™-8xHis，產品目錄 ＃B3H | | pAB-bee-FH™，產品目錄 ＃B3FH | | pAB-bee，目錄號。＃B3 | | | | | | | | ProGreen™，產品目錄。＃A1 |
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| | 圖3.與ProGreen™杆狀病毒載體相容的質粒轉移載體的示意圖。所有質粒轉移載體都具有允許質粒在大腸杆菌中繁殖的相同質粒“主鏈” （由藍色雙線表示），但它們在多麵體蛋白啟動子下遊部分（由黑色三角形表示）不同。有關概念性細節，請參閱技術。單擊質粒名稱以獲取有關每個質粒的詳細信息。單擊Cat＃進行定價和訂購。
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| | 表1.與ProGreen™兼容的其他供應商的質粒轉移載體。 |
| | | 諾瓦根 | 法明根 | OET | 克隆泰克 |
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pTriEx™-1.1
pTriEx™-1.1 Hygro
pTriEx™-1.1 Neo
pTriEx™-2
pTriEx™-2 Hygro
pTriEx™-2 Neo
pTriEx™-3
pTriEx™-3 Hygro
pTriEx™-3 Neo
pTriEx™-4
pTriEx™-4 Hygro
pTriEx™-4 Neo
pTriEx™-4 Ek / LIC | pBAC™-1
pBACgus™-1
pBAC™-2cp
pBACgus™-2cp
pBAC™-3
pBACgus™-3
pBAC4x™-1
pBACgus4x™-1
pBAC™-5
pBACgus™-5
pBAC™-6
pBACgus™-6
pBACsurf™ -1 |
| BaculoGold™pAcGHLT-A
BaculoGold™pAcGHLT-B
BaculoGold™pAcGHLT-C
BaculoGold™pAcGP67A
BaculoGold™pAcGP67B
BaculoGold™pAcGP67C
pVL1392-XylE | pOET™1-5
pOET™2
pOET™1C_6xHis
pOET™2C_6xHis
pOET™1N_6xHis
pOET™2N / C_6xHis | BacPAK™8
BacPAK™9
BAcPAK™8-gus |
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| | 如果您尚未使用杆狀病毒表達係統（也稱為杆狀病毒表達載體係統或BEVS）工作，可以在TECHNOLOGY上進行快速更新。有關杆狀病毒轉染，重組杆狀病毒的繁殖和重組杆狀病毒蛋白表達研究的簡單在線說明，請轉到杆狀病毒教程。 |
