支原體(ti) 是細胞培養(yang) 物的常見和嚴(yan) 重汙染物。已顯示  30%-87%的細胞培養(yang) 物感染支原體(ti) 。許多支原體(ti) 汙染，特別是在連續細胞係中，生長緩慢，不破壞宿主細胞，但仍能夠影響各種參數，導致結果不可靠或錯誤。這些影響包括代謝、生長、活力、、RNA和蛋白質合成以及形態的變化。支原體(ti) 檢測是確保準確研究和可靠生物技術產(chan) 品的必要質量控製工具。

e-Myco™（版本2.0）產(chan) 品是一組引物，旨在檢測是否存在可能汙染生物材料（如培養(yang) 細胞）的支原體(ti) 。常規

• e-Myco™支原體PCR預混液：PCR條中的藍色沉澱
• 對照：無色透明液體
• 去DNase/RNase水：無色透明液體

No 目錄 組成 25235 25236

• 隨著時間的推移，PCR抑製物質可能在細胞培養基中蓄積。
• 血清超過10 ~ 12%的培養基對PCR等下遊應用有抑製作用。而且，細胞培養基中的常規材料酚紅很可能發生交叉反應，從而幹擾PCR中的信號。
• 這些負麵影響可以通過使用Myco-Spin支原體提取試劑盒進行樣品製備來克服。
• 為此，建議純粹從樣本中分離基因組，以確保分析的準確性和重複性。

1. 製備200 μL細胞培養材料，然後轉移至新的1.5 mL微管中
2. 向樣品管中加入200 μL Buffer ML1，20 μL Proteinase K和5 μL RNase ASolution
    

用於(yu) 檢測支原體(ti) 的技術涉及在選擇性培養(yang) 基上培養(yang) 樣品，

這需要至少1周才能獲得結果，而通過用該引物組進行PCR，這是基於(yu) 保守的16S rRNA，在數小時內(nei) 獲得檢測結果。再者，如果你想知道詳細的物種，你可以從(cong) 你設計的引物進行PCR和測序。采用的8-甲氧基補骨脂素(8-MOP)用於(yu) 消除汙染的模板活性。已知8-MOP在波長320-400 nm入射光光光活化後嵌入雙鏈核酸，形成共價(jia) 鏈間交聯。構建該產(chan) 品的內(nei) 部對照以識別假陰性  結果  in  每個(ge)  反應。以下  內(nei) 部  設計對照  in  此類  a  方式   的

e-Myco™

1 支原體(ti) PCR預混物

3 不含DNase/RNase

水

< 0.01%熱啟動菲律宾新利网上娱乐 聚合酶

< 0.01%dATP、dTTP、dGTP、dCTP

< 0.005%支原體(ti) 引物，內(nei) 部對照

< 0.001%8-MOP（溶於(yu) DMSO）

從(cong) 豬鼻支原體(ti) 汙染的培養(yang) 人細胞中提取的基因組 < 0.01%。

無模板對照

< 去DNase/RNase水

48T 8T

25 μL x 3T 25 μL x 1T

並通過倒置或移液充分混合。

3. 將裂解物在56 ℃（預熱的加熱塊或水浴）下孵育10 min。
4. *裂解後，向上層樣品管中加入200 μL Buffer ML2，充分混勻。
5. 向裂解液中加入200 μL無水乙醇，輕輕顛倒5-6次或吸液混勻。請勿渦旋。混合後，短暫離心1.5 mL試管，除去蓋子內部的液滴。

樣本引物對用於(yu) 擴增內(nei) 部對照和靶，通過大小進行區分。e-Myco™支原體(ti) PCR檢測試劑盒（版本2.0）包含PCR的所有組分，模板除外：i-Star菲律宾新利网上娱乐TM 聚合酶、dNTP、10x緩衝(chong) 液、引物、8-MOP和支原體(ti) 部分基因擴增的內(nei) 部對照。因此，您可以添加模板並進行PCR反應。

• 預混型：該e-Myco™支原體PCR檢測試劑盒（版本2.0）包含PCR反應的所有組分。您隻需添加模板或樣本。
• 廣義種屬檢測：您可以檢測五種常見的細胞培養-感染支原體以及其他各種支原體
• 菌種確定：您可以通過對擴增的PCR產物進行測序來確定支原體的菌種。
• 內部對照品：產品中嵌入的外源性內部陽性對照品可防止可能由錯誤PCR檢測引起的誤判。
• 消除殘留汙染係統：8-MOP溶液可防止PCR產物的殘留汙染。
• 僅供研究使用，不用於診斷程序。

e-Myco™支原體(ti) PCR檢測試劑盒（版本2.0）的開發、設計和銷售僅(jin) 供研究使用。預期不用於(yu) 人類或動物疾病診斷。不得在人或動物體(ti) 內(nei) 或體(ti) 外使用。在將其用於(yu) 其他目的之前，用戶必須按照適用法律、指令和法規確認係統。

• 移液器和移液器吸頭（氣溶膠屏障）•Myco-Spin支原體提取試劑盒
• 熱循環儀 •渦旋混合器
• 一次性手套 •加熱塊

• 保存條件：接收後-22~-18 ℃保存。
• 有效期：e-Myco™支原體PCR檢測試劑盒（版本2.0）在適當的儲存條件下可儲存長達12個月，性能和質量均未降低。產品包裝盒上標有失效日期。

6. 在不潤濕邊緣的情況下，小心將全部裂解物轉移至旋轉柱（2 mL收集管中），蓋上蓋子，並以13,000 rpm離心1 min。棄去濾液，將旋轉柱置於2 mL收集管中（重複使用）。
7. 向色譜柱中加入700 μL緩衝液MWA，並以13,000 rpm離心1 min。
8. 在不潤濕邊緣的情況下，向色譜柱中加入700 μL緩衝液MWB，並以13,000 rpm離心1 min。棄去流穿液，將色譜柱置於2.0 mL采集管中（重複使用），然後再次離心1 min以幹燥膜。*丟棄穿柱管和收集管。
9. 將旋轉柱置於新的1.5 mL試管（未提供）中，並將50 μL緩衝液ME直接置於膜上。在室溫下孵育1 min，然後以13,000 rpm離心1 min以洗脫。

1. 在1.5 mL試管中製備供試細胞培養物的細胞懸液。然後用一般計數方法計數細胞數。每次檢測至少需要5 x 104個細胞。

注：強支原體(ti) 感染隻需10 ~ 100個(ge) 細胞即可檢出，而弱感染需要5000 ~ 50000個(ge) 細胞以上的細胞。您可以根據您懷疑的感染率稀釋模板。我們(men) 建議您在製備直接上清液的係列稀釋液後進行PCR反應，以獲得結果。

2. 將計數的細胞（超過5 × 104個細胞）轉移至1.5 mL試管中。在微量離心機中旋轉10-15秒。小心倒出上清液。
3. 將細胞重懸於1 mL無菌PBS或DPBS溶液中進行清洗。
4. 在微量離心機中旋轉10-15秒。小心倒出上清液。

[選項]再次重複該清洗步驟。

5. 將細胞沉澱重懸於100 μL無菌PBS或DPBS溶液中。

注：如果您希望獲得結果，使用PBS溶液優(you) 於(yu) Tris(10 mM，pH 8.5)、TE(10 mM Tris，0.1 mM EDTA)或高壓滅菌DW。

6. 在95 ℃下加熱樣品10 min，渦旋5-10 s。然後，使用台式離心機（室溫）以13,000 rpm離心2 min。
7. 將一等份加熱上清液轉移至新試管中。該上清液將用作PCR的模板。