| 尺寸 | 貨號 | 脂質組成 | 價格 | 數量 | 小計 |
|---|---|---|---|---|---|
| 2毫升 | GEN-7027 | DC-Chol：DOPE（1：1） | $ 750.00 | $ 0.00 | |
| 2毫升 | GEN-7028 | DC-Chol：DOPE（1：2） | $ 750.00 | $ 0.00 | |
| 2毫升 | GEN-7029 | 含0.5％NBD-DOPE（熒光）的DC-Chol：DOPE（1：1） | $ 850.00 | $ 0.00 | |
| 2毫升 | GEN-7030 | 含0.5％Rhod-PE（熒光）的DC-Chol：DOPE（1：1） | $ 850.00 | $ 0.00 | |
| 2毫升 | GEN-7031 | 含0.5％NBD-DOPE（熒光）的DC-Chol：DOPE（1：2） | $ 850.00 | $ 0.00 | |
| 2毫升 | GEN-7032 | 含0.5％Rhod-PE（熒光）的DC-Chol：DOPE（1：2） | $ 850.00 | $ 0.00 | |
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陽離子脂質體(ti) 傳(chuan) 統上用於(yu) 傳(chuan) 遞遺傳(chuan) 物質，例如各種類型的（p，c，CpG ，寡核苷酸，反義(yi) 寡核苷酸等），各種類型的RNA（例如siRNA，mRNA等）和核酸酸模擬物（NAM）。 將封裝到常規的中性帶電荷的基於(yu) PC的脂質體(ti) 中可能是一個(ge) 技術問題，主要是由於(yu) 質粒的大小。由於(yu) 這個(ge) 問題在80年代後期，已經開發了由陽離子脂質和PE組成的脂質體(ti) 。這個(ge) 想法是用陽離子脂質的正電荷中和p的負電荷，以便主要由於(yu) 靜電相互作用有效地捕獲更多質粒並將其傳(chuan) 遞到細胞中。通常，該程序僅(jin) 基於(yu) 將陽離子脂質體(ti) 與(yu) 或RNA混合並將其添加到細胞中即可。這導致骨料的配方。
為(wei) 了設計合適的陽離子脂質用於(yu) 基因傳(chuan) 遞，已將兩(liang) 種方法用於(yu) 陽離子脂質合成：1）基於(yu) 膽固醇的設計，例如DC-膽固醇和GL-67脂質，以及2）非基於(yu) 膽固醇的設計，例如作為(wei) DOTAB，DDAB和DOTMA。 為(wei) 了使用脂質體(ti) 在體(ti) 外成功轉移基因，應考慮一些因素： i）結合和包裝脂質體(ti) 中 / RNA的能力； ii）包裝的 / RNA與(yu) 細胞表麵的相互作用； iii） / RNA內(nei) 在化的效率； iv）萬(wan) 一發生內(nei) 吞作用，從(cong) 內(nei) 體(ti) 釋放細胞內(nei) ； v）細胞核中的轉基因表達水平。 已根據其在酸性條件下釋放其含量的趨勢設計了對pH敏感的脂質體(ti) 。主要概念基於(yu) 病毒，該病毒通過pH 5-6的蛋白質與(yu) 內(nei) 體(ti) 膜融合，並在到達溶酶體(ti) 之前將其遺傳(chuan) 物質傳(chuan) 遞到細胞質中。 通常，pH敏感脂質體(ti) 由二油酰基磷脂酰乙醇胺（DOPE）組成。由於(yu) 磷脂酰乙醇胺（PE）在酸性條件下會(hui) 發生變化，因此據信它可以充當膜融合促進劑。 脂質體(ti) 與(yu) 細胞之間相互作用的有效性高度依賴於(yu) 脂質體(ti) 組合物。脂質體(ti) 通過各種內(nei) 吞過程捕獲，效率取決(jue) 於(yu) 細胞類型和脂質體(ti) 大小。各種大小和電荷的脂質體(ti) 可通過吞噬作用附著於(yu) 巨噬細胞和嗜中性粒細胞。脂質體(ti) 附著到細胞表麵後，由於(yu) 早期內(nei) 體(ti) 的酸性更高（6.50），內(nei) 化進入內(nei) 體(ti) 。通過成熟或囊泡融合將脂質體(ti) 轉移到酸性更高的pH（5.5-6.0）的後一個(ge) 內(nei) 體(ti) ，這需要10-15分鍾。攝取後二十分鍾（或更長時間），內(nei) 含物被遞送至pH 5.0或更低的溶酶體(ti) 。溶酶體(ti) 是內(nei) 吞途徑中主要的降解和後的內(nei) 吞區段，pH不敏感的脂質體(ti) 在其中積累和降解。但是，在pH敏感脂質體(ti) 滲透到細胞中後，不會(hui) 發生積累和降解。
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| 緩衝液和脂質體大小 | 規格 |
|---|---|
| 緩衝 | 去離子無核糖核酸水 |
| pH值 | 7 |
| 脂質體大小 | 100納米 |
| 熒光染料 | 激發/發射（nm） | 分子結構 |
|---|---|---|
| 1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-（7-硝基-2-1,3-苯並惡二唑-4-基）（銨鹽） | 460/535 |  |
| 1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-（lissamine羅丹明B磺酰基）（銨鹽） | 560/583 |  |
基於(yu) 陽離子胺氮（在陽離子脂質中）和磷酸基團濃度計算正負電荷之比。和RNA是核苷酸的聚合物。它們(men) 通過磷酸二酯鍵（一種特定類型的共價(jia) 鍵）結合在一起，該磷酸二酯鍵可以長到數百萬(wan) 個(ge) 核苷酸。由於(yu) 存在構成每個(ge) 核苷酸的磷酸根基團（戊糖+含氮堿基+磷酸根），和RNA帶負電。當形成磷酸二酯鍵的一部分時，它們(men) 保留2個(ge) 負電荷中的1個(ge) 。失去另一個(ge) 負電荷以形成與(yu) 新戊糖的另一個(ge) 酯鍵。這就是將該鍵稱為(wei) “磷酸二酯”的原因。例如，陽離子脂質DC-膽固醇具有以下結構。
DC-膽固醇具有兩(liang) 個(ge) 氮原子，但是靠近羧基的氮不是帶正電的。DC-膽固醇僅(jin) 包含一個(ge) 可質子化的氮原子。因此，每個(ge) 分子有一個(ge) 正電荷。1 nmol的DC-膽固醇可貢獻1 nmol的正電荷。對於(yu) 其他脂質，請查看其分子結構以找到分子中的氮原子數。
RNA與(yu) 不同，是單鏈分子。但是，siRNA是雙鏈的。例如，在一個(ge) 長21 bp的siRNA分子中，由於(yu) 堿基對中有2個(ge) 核苷酸，並且每個(ge) 核苷酸帶有一個(ge) 負電荷，因此存在42個(ge) 負電荷。
1 µg 可產(chan) 生3.1 nmol帶負電的磷酸鹽。
魚精蛋白是一種高度帶正電荷的聚陽離子肽，分子量為(wei) 5.1 kDa，可作為(wei) 縮合試劑。已知魚精蛋白是精子核中用於(yu) 濃縮的主要成分。所有魚精蛋白都含有精氨酸，並且是強堿性的（等電點= 11-12）。
由脂質魚精蛋白-（LPD）組成的脂質多聚體(ti) 是通過魚精蛋白預壓縮的與(yu) 陽離子脂質體(ti) 的結合而產(chan) 生的。這與(yu) 通過陽離子脂質和之間直接靜電相互作用形成的陽離子脂質體(ti) -脂質複合物相反。脂質魚精蛋白-具有淨正表麵電荷，據信對於(yu) 其與(yu) 陰離子細胞表麵蛋白聚糖的結合是*的。細胞表麵的這種靜電相互作用觸發脂質-複合物的內(nei) 吞作用進入細胞。
向和陽離子脂質體(ti) 中添加魚精蛋白的順序非常重要。一種方案涉及將質粒與(yu) 硫酸魚精蛋白預複合，然後添加陽離子脂質體(ti) 。該協議有兩(liang) 個(ge) 缺點。其中之一是需要大量過量的陽離子脂質才能實現大水平的基因表達。通常，陽離子脂質/ 摩爾比必須大於(yu) 35，才能有效體(ti) 內(nei) 轉染。另一個(ge) 問題是難以製備濃縮樣品。這是由於(yu) 魚精蛋白硫酸鹽與(yu) 質粒的強烈相互作用，這使得高濃度魚精蛋白/ 複合物的製備變得困難，尤其是在需要高魚精蛋白/ 比（w / w）的情況下。為(wei) 了解決(jue) 這些問題，已經開發了第二種方案，其中將硫酸魚精蛋白與(yu) 陽離子脂質體(ti) 混合，然後添加質粒。由於(yu) 陽離子脂質體(ti) 和魚精蛋白之間競爭(zheng) 與(yu) 質粒的相互作用，大大降低了魚精蛋白和之間的強相互作用。在一定條件下，這將導致形成平均直徑小於(yu) 150 nm的LPD。
為(wei) 了計算正負比率，您需要考慮：
聚乙二醇化已在脂質體(ti) 學領域廣泛使用了數十年。聚乙二醇化的好處是*的，包括改善脂質複合體(ti) 的係統循環。然而，脂質複合體(ti) 的PEG化的缺點也已經被很好地證明。這包括防止脂質複合物與(yu) 靶細胞締合以及抑製從(cong) 內(nei) 體(ti) 區室釋放，這導致非常低的轉染效率。
隨著摻入陽離子脂質體(ti) 中的PEG化脂質的分子量增加，陽離子脂質體(ti) 的細胞毒性增加。例如，含有PEG5000的脂複合物比含有PEG2000的脂複合物更具細胞毒性。陽離子脂質體(ti) 的轉染活性隨PEG-DSPE脂質百分比的增加而降低。先前的研究表明，添加0.5％，1％和2％的PEG-PE分別將其活性降低至肺部原始熒光素酶活性的60％，40％和10％。還已經報道將PEG-PE（1％的陽離子脂質）添加到新形成的質粒-脂質體(ti) 複合物中可以防止複合物在儲(chu) 存期間聚集。但是，將含有PEG-PE的複合物在4°C下儲(chu) 存會(hui) 緩慢恢複其原始活性。一般來說，聚乙二醇化不用於(yu) 轉染實驗。但是，特別是在某些實驗中體(ti) 內(nei) 實驗使用聚乙二醇化脂複合物。
如果您需要進行涉及陽離子脂質體(ti) 聚乙二醇化的實驗，則強烈建議先將適量的遺傳(chuan) 物質添加到脂質體(ti) 中，然後再在外部添加聚乙二醇化脂質（插入後）並孵育脂質體(ti) ，以形成脂質複合物。然後將PEG脂質在高於(yu) 陽離子脂質的液相到凝膠相變溫度的溫度下放置一小時（如果是不飽和陽離子脂質，例如DOTAP，則可以在室溫下孵育）。
在許多實驗中，由於(yu) 不使用傳(chuan) 統的PEG2000-DSPE，而是使用C8-PEG2000-神經酰胺對脂質複合物進行PEG化，因為(wei) PEG-神經酰胺是一種“脫落的PEG”，在與(yu) 生物膜接觸時會(hui) 從(cong) 脂質複合物中擴散出去。
由於(yu) 脂質體(ti) 製劑中使用的陽離子脂質具有細胞毒性，因此強烈建議進行細胞生存力分析。可以通過改良的Alamar藍分析法評估細胞活力。阿拉瑪藍含有氧化還原指示劑，該指示劑在細胞代謝的氧化還原範圍內(nei) 均顯示熒光變化。簡而言之，將10μL的10％（v / v）Alamar藍色染料添加到100μL樣品中。在37ºC下孵育2小時後，在熒光分光光度計上在570 nm和600 nm上讀取所得的熒光。使用以下公式計算細胞生存力（對照細胞的百分比）：
PlainGenesome®是由納米級單層脂質體(ti) 製成的白色半透明液體(ti) 。FluorescentGenesome®製劑帶有顏色，其顏色取決(jue) 於(yu) 所用熒光染料的類型（有關(guan) 外觀，請參見SDS）。通常由於(yu) 脂質體(ti) 小，在小瓶底部不會(hui) 發生沉澱。將脂質體(ti) 包裝在琥珀色的小瓶中。
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