polyplus-transfection FectoPRO說明書(shu)
| 試劑 | FectoPRO ® |
|---|---|
| 分子交付 | 脫氧核糖核酸 |
| 應用 | 生物生產(chan) |
| 細胞類型 | 懸浮液 CHO、HEK-293 和衍生物 |
| 轉染次數 | 1 mL FectoPRO ®足以將 800 mL 的細胞培養(yang) 物轉染超過 1 L |
| 貯存 | 5°C ± 3°C，如果儲(chu) 存得當，自生產(chan) 之日起可穩定 3 年 |
| 提供 | FectoPRO ®助推器 |
使用瞬時轉染和基因表達實現蛋白質產(chan) 量。
FectoPRO轉染試劑專(zhuan) 為(wei) 使用低 量（< 1 µg/ml 細胞培養(yang) 物）在各種無血清培養(yang) 基中的懸浮 CHO 和 HEK-293 細胞中增強瞬時基因表達 (TGE)而設計。
FectoPRO® 介導的轉染過程可以輕鬆地從(cong) 幾毫升細胞培養(yang) 物擴展到幾升細胞培養(yang) 物，確保強大的可重複蛋白質生產(chan) 。更高的生產(chan) 力和低 量要求使 FectoPRO® 成為(wei) 生物生產(chan) 過程的經濟高效的解決(jue) 方案。
| 參考編號 | 產品 | 轉染試劑 | 表達助推器 | 表達培養基 |
|---|---|---|---|---|
| 116-001 | FectoPRO® 試劑 | 1 毫升 | 1 毫升 | —— |
| 116-010 | FectoPRO® 試劑 | 10 毫升 | 10 毫升 | —— |
| 116-100 | FectoPRO® 試劑 | 100 毫升 | 100 毫升 | —— |
| 716-06L | FectoCHO® CD 培養基 | —— | —— | 6 x 1 升 |
| 716-01LKIT | FectoCHO® 表達係統 | 1 毫升 | 1 毫升 | 1升 |
FectoPRO ®在無血清培養(yang) 基中懸浮生長的 CHO 和 HEK-293 細胞中實現了驚人的高蛋白質和抗體(ti) 產(chan) 量（圖 1）。
圖 1. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細胞中產(chan) 生驚人的抗體(ti) 產(chan) 量。將細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yang) 基中，並按照各自推薦的方案用 FectoPRO ® (0.8 µg /ml) 或 FreeStyle™ MAX 試劑 (1.25 µg /ml)轉染試劑。使用蛋白 G 生物傳(chuan) 感器（fortéBIO ®octet RED96 係統）在轉染後 1 至 6 天測定重組小鼠 IgG 的產(chan) 量。FreeStyle™ 是 Life Technologies™ Corporation 的商標。數據由 ProteoGenix SAS（法國）友情提供。
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在轉染效率方麵，FectoPRO ®在很大程度上優(you) 於(yu) 其他轉染試劑，例如生物生產(chan) 過程中常用的線性 PEI（圖 2），從(cong) 而導致更高的蛋白質產(chan) 量（圖 3）。
圖 2. FectoPRO ®在懸浮 CHO 細胞中提供高轉染效率。將 FreeStyle™ CHO-S 細胞以 1 x 10 6 個(ge) 細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yang) 基中，並使用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX Reagent 使用 0.4 µg/ml 和 1.25 µg/ml分別是 GFP 表達質粒。使用熒光顯微鏡在轉染後 24 小時測定 GFP 表達。
圖 3. FectoPRO ®在懸浮 CHO 和 HEK-293 細胞中提供了蛋白質產(chan) 量。FreeStyle™ CHO-S 和 HEK-293F 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ CHO 或 293 表達培養(yang) 基中，並用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.4 µg /ml)、FreeStyle™轉染MAX Reagent (1.25 µg /ml) 或 PEIpro ® (1 µg /ml) 遵循各自試劑的推薦方案。在轉染後 72 小時（CHO 細胞）和 120 小時（HEK-293 細胞），通過蛋白 G 親(qin) 和定量 (HPLC) 和蛋白質印跡分析 IgG3-Fc (34 kDa) 的產(chan) 生。標準品對應於(yu) 純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
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高質量的質粒 製備可能非常昂貴，尤其是當大規模蛋白質生產(chan) 需要大量 和許多質粒時。FectoPRO ®使用 0.4 至 0.6 µg / 10 6細胞 / ml 細胞培養(yang) 物可節省 40 至 60% 的 成本；因此使該套件成為(wei) 生物生產(chan) 過程的經濟實惠的解決(jue) 方案。
表 1.根據製造商的建議，用於(yu) 轉染的 量和試劑量（FectoPRO ®和競爭(zheng) 對手）。
蛋白質生產(chan) 過程的持續時間在過去幾年有所增加，現在大多數蛋白質生產(chan) 過程持續 1-2 周以獲得最佳蛋白質生產(chan) 量。FectoPRO ® 的開發旨在確保持續數天的蛋白質生產(chan) ，同時保持高細胞活力以實現更持久的蛋白質生產(chan) （圖 4）。
圖 4. FectoPRO ®在懸浮細胞中提供持續的蛋白質生產(chan) 。FreeStyle™ HEK-293F 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種在 30 ml FreeStyle™ 293 表達培養(yang) 基中，並按照標準方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg /ml)轉染。在不同時間點後通過蛋白 G 親(qin) 和力定量 (HPLC) 測定 IgG3-Fc 的產(chan) 生。使用 FreeStyle™ CHO-S 獲得了類似的結果（數據未顯示）。
使用可輕鬆適應各種培養(yang) 容器的強大方案簡化您的生物生產(chan) 過程。FectoPRO ®介導的轉染可以從(cong) 30 毫升線性擴展到升細胞培養(yang) 物，無需修改方案（圖 5）。
圖 5. FectoPRO ®在 CHO 細胞中易於(yu) 擴展和重現。FreeStyle™ CHO-S 細胞以 1 x 10 6 個(ge) 細胞/ml接種在 30 ml、100 ml、300 ml 或 1 L FreeStyle™ CHO 表達培養(yang) 基中，並用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster (0.5 µg /ml)轉染. 在第 1 天至第 6 天，使用台盼藍排除測定法測定細胞活力，並通過蛋白 G 親(qin) 和力定量 (HPLC) 和蛋白質印跡法測定 IgG3-Fc 的產(chan) 生。標準品對應於(yu) 純化的 IgG3-Fc (34 kDa)。
FectoPRO ®是使用高度受控的生產(chan) 過程製造和配製的。這確保了從(cong) 實驗到實驗的高度可重複的結果。此外，為(wei) 了滿足當前的監管指南，FectoPRO ®發布時采用了先進的質量控製，包括蛋白質生產(chan) 力規範，以保證批次間的出色一致性（圖 6）。
圖 6. FectoPRO ®具有出色的批次間重現性。懸浮CHO細胞以1 x 10 6細胞/ml接種在30ml CHO培養(yang) 基中，並按照標準方案使用3個(ge) 不同批次的FectoPRO ® (CCIII 078、CCIII 104或CCIII 106)進行轉染。轉染後 72 小時，通過蛋白 G 親(qin) 和力定量分析 IgG3-Fc 的產(chan) 生。在懸浮的 HEK-293 細胞上獲得了類似的結果（數據未顯示）。
與(yu) 其他市售試劑不同，FectoPRO ®轉染試劑盒適用於(yu) CHO 和 HEK-293 細胞（圖 2 和 3）。該試劑兼容多種培養(yang) 基配方；因此，實驗室實施簡單明了（圖 7，表 2）。
圖 7. FectoPRO ®在不同培養(yang) 基中生長的懸浮 CHO 細胞中提供了蛋白質產(chan) 量。將 CHO 細胞以 1 x 10 6細胞/ml接種到30 ml FreeStyle™ CHO 表達培養(yang) 基、CD CHO 培養(yang) 基或 Pro-CHO™ 4 培養(yang) 基中，並按照推薦的方案用 FectoPRO ® + FectoPRO ® Booster 或 FreeStyle™ MAX 試劑轉染各自的試劑。在轉染後 72 小時通過蛋白 G 親(qin) 和定量 (HPLC) 測定 IgG3-Fc 的產(chan) 生。
表 2.在不同培養(yang) 基中使用 FectoPRO ®培養(yang) CHO 細胞的蛋白質產(chan) 量。
表 3. HEK-293 細胞在不同培養(yang) 基中使用 FectoPRO ® 的蛋白質產(chan) 量。
探索我們(men) 專(zhuan) 用於(yu) CHO 細胞的試劑盒：FectoCHO ®表達係統
FreeStyle TM、CD FortiCHO TM、CD OptiCHO TM、Expi293 TM、ExpiCHO TM和CD293 是Gibco ® 的商標。
Pro-CHO TM、PowerCHO TM和 Pro293 TM是 Lonza TM Group 的商標。
HyClone TM、HyCell TM和TransFx TM是GE Healthcare TM 的商標。
BalanCD ®和Transfectory TM是Irvine Scientific公司的商標TM。
蛋白質生產(chan) 包括在細胞係中以小/中到大規模過表達重組蛋白質或肽。產(chan) 生的生物分子可用於(yu) 研究目的，如結構表征，一直到治療或醫學應用。
FectoPRO ®符合生物製造指南。事實上，FectoPRO ®保證不含動物源成分，並且是化學成分確定的。對生產(chan) 的每個(ge) 批次進行係統的批次管理和放行測試。此外，FectoPRO ®轉染試劑盒經過先進的質量控製：蛋白質生產(chan) 力、細胞活力和*無菌。
此外，Polyplus-transfection ®自 2002 年起獲得 ISO 9001 質量管理體(ti) 係認證；這一級別的認證向全球客戶保證，供應商已為(wei) 產(chan) 品開發、製造、銷售和客戶支持建立了可靠且有效的流程。
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