單位定義(yi) ：

• 一個單位的 TGIRT ® -III 逆轉錄酶 (RT) 活性是使用 poly(rA)/oligo(dT) 42作為底物在 60°C 下在 1 分鍾內聚合 1 nmole dNTP 所需的酶量。

酶濃度：

• 200 單位/微升

酶儲(chu) 存緩衝(chong) 液：

• 20 mM Tris-HCl (pH 7.5)、500 mM KCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、50% 甘油

酶特性和新活性：

• 比逆轉錄病毒逆轉錄酶具有更高的熱穩定性、持續合成能力和保真度，允許從高度結構化或高度修飾的 RNA （例如 tRNA）和包含富含 GC 重複擴增的 RNA合成全長、端到端的 c 。1-9,12,15,18

• 新型端到端模板轉換活動，可在逆轉錄過程中連接 RNA-seq 或 PCR 接頭，無需單獨的 RNA 3'-接頭連接步驟。1這種模板轉換活動極大地促進了鏈特異性 RNA-seq 文庫的構建，與使用隨機六聚體引物或使用 RNA 連接酶進行接頭連接的程序相比，偏差更小。1,7,8

• 從退火引物高效合成 c。退火引物的預測 T m應大於 60 o C。建議將酶與反應混合物中的底物在室溫下預孵育 30 分鍾，並通過添加 dNTP 開始反應。新應用的最佳條件應通過測試 25 至 450 mM NaCl 的鹽濃度範圍來確定。

酶的建議用途：

1. 全麵的鏈特異性轉錄組分析。8

2. 全細胞、外泌體(ti) 、血漿和其他無細胞 RNA 的 RNA-seq。7、8、15

3. miRNA、tRNA 和其他小的非編碼 RNA 的分析。1-9,12,15

4. RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP 和 CRAC，​​用於(yu) 表征 RNA-蛋白質相互作用和核糖體(ti) 分析。1,10,11

5. 通過高通量測序鑒定 RNA 堿基修飾。4、5、13、14

6. 使用 SHAPE 和 DMS 修飾等方法進行全基因組或靶向 RNA 結構映射。1,16

7. 富含 GC 的重複擴增的逆轉錄和定量。18

8. 長 c 的合成。1

9. RT-qPCR。1

10. 單鏈 序列。17

11. FFPE腫瘤樣本分析（谘詢InGex技術支持）。

酵素的優(you) 點：

1. 全麵的鏈特異性轉錄組分析。

與(yu) 非鏈特異性 TruSeq v2 相當且優(you) 於(yu) 鏈特異性 Tru-Seq v3，TGIRT®-seq 的 ribodepleted、碎片化通用人類參考 RNA 樣本概括了人類轉錄本和摻入的相對豐(feng) 度。TGIRT®-seq 明顯比 TruSeq v3 更具鏈特異性，並消除了 TruSeq 固有的隨機六聚體(ti) 引發的采樣偏差。與(yu) TruSeq 相比，TGIRT®-seq 顯示出更均勻的 5' 到 3' 基因覆蓋並識別出更多的剪接點。TGIRT®-seq 能夠同時分析同一 RNA-seq 中的 mRNA 和 lncRNA 作為(wei) 結構化的小 ncRNA，包括 TruSeq 數據集中基本上不存在的 tRNA。8

2. 全細胞、外泌體(ti) 、血漿和其他細胞外 RNA 的 RNA-seq。

快速處理時間（通過 PCR 步驟構建 RNA-seq 文庫<5 小時）；需要少量 RNA（低 ng 範圍）；全麵的轉錄譜，包括 mRNA 和 lncRNA 以及小 ncRNA，包括 tRNA、pre-miRNA 和其他結構化小 ncRNA 的全長讀數；比傳(chuan) 統方法更少的偏見和更高的鏈特異性。7、8、15

3. 在 RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP、CRAC、核糖體(ti) 分析等方法中，通過 TGIRT® 模板切換構建 RNA-seq 文庫。

快速處理時間（通過 PCR 步驟構建 RNA-seq 文庫<5 小時）；需要少量 RNA（低 ng 範圍）；不需要 RNA 連接酶，程序中的步驟更少，偏差更小，效率更高。1,10,11

4. 比逆轉錄病毒 RT 具有更高的熱穩定性、持續合成能力和鏈置換活性。

• 使用錨定 oligo(dT) 引物構建多腺苷酸化 RNA 的 RNA-seq 文庫，其 5' 到 3' 覆蓋率比沒有核消耗步驟的逆轉錄病毒 RT 更均勻。1
• 通過毛細管電泳的基於的方法狀或DMS結構映射以使RNA結構映射顯著升onger閱讀長度和過早停止比逆轉錄病毒RT更少。1,16
• 能夠分析包含富含 GC 的重複擴增的 RNA 模板。18
• 能夠從 tRNA 和其他小型結構化/修飾的 ncRNA 合成全長、端到端的 c，這些 ncRNA 對逆轉錄病毒 RT 無效。4-9,12-15     

5. 人血漿和大腸杆菌 基因組 的ss-seq 。

通過直接在 鏈的 3' 末端啟動 合成，同時連接 -seq 接頭，無需末端修複、拖尾或連接，從(cong) 而以更簡單的工作流程捕獲精確的 末端。能夠分析核小體(ti) 定位、轉錄因子結合位點、 甲基化位點和起源組織。17