targetingsystems蛋白質表達說明書

targetingsystems蛋白質表達說明書(shu)

使用 Targefect-293F 高效轉染 Free style 293 細胞 

獲得高水平蛋白質表達的簡單且經濟的解決(jue) 方案。 

Targefect-293F 是一種脂質體(ti) 轉染試劑，專(zhuan) 為(wei) 高效轉染自由式 293 細胞和懸浮 CHO 細胞培養(yang) 物而配製。 

轉染方案

Targefect-293FS 試劑應在 -20 o C 下冷凍保存。在使用前將試劑解凍至室溫。使用前將試劑全速渦旋 30 秒 2-3 次。

當 293S 細胞生長到足夠高的密度（50ml 或更多時為(wei) 200 萬(wan) 個(ge) 細胞/ml）時，繼續準備它們(men) 以進行瞬時轉染。 

取回兩(liang) 個(ge) 125 毫升康寧搖瓶。

添加足夠的細胞和培養(yang) 基，以 110 萬(wan) 個(ge) 細胞/毫升的密度獲得 27 毫升的體(ti) 積。使用來自 Invitrogen 的 Freestyle 293 培養(yang) 基或來自 Hyclone 的 Transfx-293 培養(yang) 基。

將燒瓶置於(yu) 125rpm 和 8% CO2 的搖床培養(yang) 箱中。

檢索 GFP 和 Targefect-293FS 試劑。在冰上解凍這兩(liang) 個(ge) 組件。一定要劇烈渦旋脂質 30-60 秒。

取回兩(liang) 個(ge) 15 毫升錐形管。在每管中加入 1.5ml 來自 Invitrogen 的 OPTI-MEM 培養(yang) 基。將一個(ge) 標記為(wei) ，另一個(ge) 標記為(wei) 脂質。

在 管中，添加 30ug GFP 並通過輕彈管底部進行混合。如果您不確定 的無菌性，您可以使用注射器和針頭通過 0.22 微米過濾器對其進行過濾。

在脂質管中，加入 30ul 的 Targefect-293FS Reagent 並劇烈渦旋混合物 30-60 秒。

讓 和脂質混合物在室溫下孵育 5 分鍾。

在孵育結束時，將 混合物添加到脂質混合物中，然後輕彈管底部混合內(nei) 容物。

讓 -脂質複合物在室溫下形成 20 分鍾。

在 20 分鍾結束時，將 ~3ml 的 -脂質混合物添加到兩(liang) 個(ge) 125ml 搖瓶中的一個(ge) 。標記為(wei) GFP 控製。向另一個(ge) 搖瓶中加入 3ml OPTI-MEM 並標記為(wei) Cell Only Control。

每個(ge) 燒瓶中的最終密度應為(wei) ~1x10^6 細胞/毫升。

約 48 小時後，GFP 對照燒瓶中的細胞中應出現明顯的綠色熒光。5 天後，兩(liang) 個(ge) 燒瓶之間應該有非常明顯的區別。

在 5 天結束時收獲兩(liang) 個(ge) 燒瓶。將細胞降速並保存 sup。儲(chu) 存在 4 o C 直到需要。 

使用上述轉染試劑轉染效率已達到 90% 以上（使用 GFP 作為(wei) 標記）。請聯係技術支持以獲取更多信息 1-866-620-4018 注意：對於(yu) 轉染 HEK-293 細胞，我們(men) 推薦使用Targefect-293 試劑

訂購信息 

• Targefect-293F，目錄 #293F-01，1ml --------------------- -- 170 美元

• Targefect=293F，目錄 #293F-10，10 毫升 --------------------------------- 1250 美元