assaygenie HUFI07676說明書(shu)
貨號：
HUFI07676
該測定法的Genie人類過氧化氫酶ELISA試劑盒可以在下列樣品中測定人類過氧化氫酶：血清，血液，血漿，細胞培養(yang) 上清液和其他相關(guan) 的上清液和組織。
我們(men) 的人過氧化氫酶 ELISA 試劑盒如何工作？
Assay Genie（酶聯免疫吸附測定）測定試劑盒設計用於(yu) 定量測量各種樣品中的分析物。由於(yu) 當今的科學家需要高影響力期刊的高質量一致數據，因此 Assay Genie 開發了我們(men) 靈敏、快速和可靠的 ELISA 試劑盒檢測係列，以滿足並超越這些需求。我們(men) 的檢測試劑盒使用定量夾心 ELISA 技術，每個(ge) 試劑盒都帶有預包被在 96 孔微量滴定板上的高度特異性抗體(ti) 。
在 Assay Genie，我們(men) 了解對速度的需求！因此，我們(men) 開發了一種超快速方案，這意味著您可以快速獲得結果。因此，一旦您準備好並鋪板了樣品、空白和標準品，您隻需使用高度特異性的生物素偶聯一抗和偶聯辣根過氧化物酶 (HRP) 的親(qin) 和素進行孵育，然後孵育適當的時間。根據協議洗滌板並添加 TMB（3,3',5,5'-四甲基聯苯胺）溶液後，由於(yu) HRP 催化的酶促反應，應檢測到藍色的出現。下一步是添加終止溶液，終止 HRP 反應，藍色變為(wei) 黃色，信號強度在 450nm 讀板器上測量。
| 產品代碼 | HUFI07676 | ||||||||||||||||
| 別名 | CAT ELISA 試劑盒、Cas1 ELISA 試劑盒、Cs-1 ELISA 試劑盒、過氧化氫酶 ELISA 試劑盒 | ||||||||||||||||
| 檢測方法 | 夾心ELISA，雙抗體(ti) | ||||||||||||||||
| 應用 | 該免疫測定試劑盒允許體(ti) 外定量測定血清血漿和其他生物體(ti) 液中的人 CAT（過氧化氫酶）濃度。 | ||||||||||||||||
| 尺寸 | 96T | ||||||||||||||||
| 範圍 | 15.625-1000pg/ml | ||||||||||||||||
| 靈敏度 | < 9.375pg/ml | ||||||||||||||||
| 貯存 | 4'C 6 個(ge) 月 | ||||||||||||||||
| 恢複 | 下麵列出的基質中加入了一定水平的人 CAT（過氧化氫酶），通過將測量值與(yu) 樣品中人 CAT（過氧化氫酶）的預期量進行比較來計算回收率。
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| 線性度 | 該試劑盒的線性通過測試添加適當濃度的人 CAT（過氧化氫酶）及其係列稀釋液的樣品進行測定。結果通過計算濃度與(yu) 預期濃度的百分比來證明。
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| 簡曆（％） | 批內(nei) ：CV<8% | ||||||||||||||||
| 筆記 | 僅(jin) 供研究使用 |
以下方案是使用生物素化檢測抗體(ti) 和鏈黴親(qin) 和素-HRP 的人 CAT（過氧化氫酶）ELISA 試劑盒的示例方案。夾心 ELISA 試劑盒允許通過使用已知分析物濃度作為(wei) 標準並繪製已知濃度與(yu) 已知標準濃度的吸光度來檢測和量化樣品中的分析物。這使研究人員可以計算樣品中存在的人類 CAT（過氧化氫酶）抗體(ti) 的數量。
在加入孔之前，在 37°C 下平衡 SABC 工作溶液和 TMB 底物至少 30 分鍾。稀釋樣品和試劑時，必須*混合均勻。建議為(wei) 每個(ge) 測試繪製標準曲線。
| 1. | 在預塗板上分別設置標準、測試樣品和控製（零）孔，然後記錄它們的位置。建議重複測量每個標準和樣品。在添加標準、樣品和對照（零）孔之前洗板 2 次！ |
| 2. | 將 0.1ml 標準溶液分裝到標準孔中。 |
| 3. | 將 0.1 ml 樣品/標準稀釋緩衝液加入對照（零）孔中。 |
| 4. | 將 0.1 ml 適當稀釋的樣品（人血清、血漿、組織勻漿和其他生物體液）加入測試樣品孔中。 |
| 5. | 用蓋子密封板並在 37°C 下孵育 90 分鍾。 |
| 6. | 取下蓋子並丟棄板內容物，將板拍在吸水濾紙或其他吸水材料上。任何時候都不要讓孔*幹燥。洗板 X2。 |
| 7. | 向上述孔（標準孔、測試樣品孔和零孔）中加入 0.1 ml 生物素檢測抗體工作液。在不接觸側壁的情況下在每個孔的底部添加溶液。 |
| 8. | 用蓋子密封板並在 37°C 下孵育 60 分鍾。 |
| 9. | 取下蓋子，用洗滌緩衝液洗滌板 3 次。讓洗滌緩衝液在每次洗滌之間在井中休息 1 分鍾。 |
| 10. | 每孔加入 0.1 ml SABC 工作液，蓋上板，37°C 孵育 30 分鍾。 |
| 11. | 取下蓋子，用洗滌緩衝液洗板 5 次，每次讓洗滌緩衝液在孔中停留 1-2 分鍾。 |
| 12. | 向每個孔中加入 90 µl TMB 底物，蓋上板並在 37°C 下避光孵育 10-20 分鍾。（注：此孵育時間僅供參考，最佳時間由最終用戶決定。）在前 3-4 孔（標準溶液濃度最高）中可以看到藍色陰影，其他孔顯示沒有明顯的顏色。 |
| 13. | 在每個孔中加入 50 µl 停止溶液並充分混合。顏色立即變為黃色。 |
| 14. | 添加終止溶液後，立即在酶標儀中讀取 450 nm 處的 OD 吸光度。 |
人 CAT（過氧化氫酶）ELISA 試劑盒組件 | 96 檢測 | 貯存 |
| ELISA 微孔板（可拆卸） | 8×12 條 | 4°C 6 個月 |
| 凍幹標準品 | 2 | 4°C/-20°C |
| 樣品/標準稀釋緩衝液 | 20毫升 | 4°C |
| 生物素標記抗體（濃縮） | 120ul | 4°C（避光） |
| 抗體稀釋緩衝液 | 10毫升 | 4°C |
| HRP-鏈黴親和素偶聯物(SABC) | 120ul | 4°C（避光） |
| SABC 稀釋緩衝液 | 10毫升 | 4°C |
| TMB底物 | 10毫升 | 4°C（避光） |
| 停止解決方案 | 10毫升 | 4°C |
| 洗滌緩衝液（25X） | 30毫升 | 4°C |
| 封板機 | 5 | —— |
Assay Genie Human CAT（過氧化氫酶）ELISA 試劑盒需要其他設備和材料來進行檢測。請參閱下麵的列表了解更多詳情。
帶 450 nm 波長濾光片的酶標儀(yi)
多通道移液器、移液器、微量離心管和一次性移液器吸頭
孵化器
去離子水或蒸餾水
吸水紙
緩衝(chong) 水庫
在進行 ELISA 檢測時，重要的是準備您的樣品以達到可能的最佳結果。下麵我們(men) 列出了為(wei) 不同樣品類型準備樣品的程序。
| 樣品類型 | 協議 |
血清 | 如果使用血清分離管，讓樣品在室溫下凝結 30 分鍾。以 1,000x g 離心 10 分鍾。立即收集血清部分並進行檢測或等分並將樣品儲(chu) 存在 -80°C。避免多次凍融循環。 如果不使用血清分離管，讓樣品在 2-8°C 下凝結過夜。以 1,000x g 離心 10 分鍾。立即取出血清並進行檢測，或將樣品等分並儲(chu) 存在 -80°C 下。避免多次凍融循環。 |
等離子體 | 使用 EDTA 或肝素作為(wei) 抗凝劑收集血漿。在收集後 30 分鍾內(nei) ，將樣品在 4°C 下以 1000 × g 離心 15 分鍾。立即收集血漿部分並進行檢測或等分並將樣品儲(chu) 存在 -80°C。避免多次凍融循環。注意：過度溶血的樣品不適合與(yu) 該試劑盒一起使用。 |
尿液和腦脊液 | 在無菌容器中收集尿液（中流），以 2000-3000 rpm 離心 20 分鍾。立即取出上清液並進行檢測。如果檢測到任何沉澱，請重複離心步驟。類似的協議可用於(yu) 腦脊液。 |
細胞培養上清 | 用移液管收集細胞培養(yang) 基，然後在 4°C 下以 1500 rpm 離心 20 分鍾。立即收集澄清的上清液並進行檢測。 |
細胞裂解液 | 在裂解緩衝(chong) 液中溶解細胞，並在冰上靜置 30 分鍾。以 14,000 xg 離心管 5 分鍾以去除不溶性物質。將上清液分裝到新管中並丟(diu) 棄剩餘(yu) 的全細胞提取物。使用總蛋白質測定法量化總蛋白質濃度。立即測定或分裝並儲(chu) 存在 ≤ -20 °C。 |
組織勻漿 | 組織勻漿的製備將因組織類型而異。用 1X PBS 衝(chong) 洗組織以去除多餘(yu) 的血液並在 20ml 1X PBS（包括蛋白酶抑製劑）中勻漿，並在 ≤ -20°C 下儲(chu) 存過夜。打破細胞膜需要兩(liang) 個(ge) 凍融循環。為(wei) 了進一步破壞細胞膜，您可以對樣品進行超聲處理。以 5000xg 離心勻漿 5 分鍾。立即取出上清液並進行檢測，或等分並儲(chu) 存在 -20°C 或 -80°C。 |
組織裂解物 | 用 PBS 衝(chong) 洗組織，切成 1-2 毫米的碎片，並用 PBS 中的組織勻漿器勻漿。加入等體(ti) 積的含有蛋白酶抑製劑的 RIPA 緩衝(chong) 液，並在室溫下輕輕攪拌裂解組織 30 分鍾。離心去除碎屑。使用總蛋白質測定法量化總蛋白質濃度。立即測定或分裝並儲(chu) 存在 ≤ -20 °C。 |
母乳 | 收集牛奶樣品並在 4°C 下以 10,000 xg 離心 60 分鍾。分裝上清液並進行測定。如需長期使用，請將樣品儲(chu) 存在 -80°C。盡量減少冷凍/解凍周期。 |
| UniProt 蛋白質功能： | 過氧化氫酶：幾乎存在於所有有氧呼吸的生物體中，用於保護細胞免受過氧化氫的毒性作用。促進細胞的生長，包括 T 細胞、B 細胞、髓係白血病細胞、黑色素瘤細胞、肥大細胞瘤細胞以及正常和轉化的成纖維細胞。同源四聚體。屬於過氧化氫酶家族。 |
| UniProt 蛋白質詳細信息： | 蛋白質類型：氨基酸代謝 - 色氨酸；內(nei) 質網; EC 1.11.1.6；細胞凋亡；能量代謝 - 甲烷；線粒體(ti) ; 水解酶；氧化還原酶 人類直係同源物的染色體(ti) 位置： 11p13 細胞成分：過氧化物酶體(ti) 膜；高爾基體(ti) ; 過氧化物酶體(ti) 基質；粘著斑；細胞內(nei) 膜結合細胞器；膜; 內(nei) 質網；溶酶體(ti) ；質膜; 線粒體(ti) 膜間隙；過氧化物酶體(ti) ；胞質溶膠 分子功能：抗氧化活性；氧化還原酶活性，作用於(yu) 作為(wei) 受體(ti) 的過氧化物；酶結合；蛋白質同二聚化活性；過氧化氫酶活性；金屬離子結合；血紅素結合；NADP 綁定；氨酰化酶活性；受體(ti) 結合 生物過程：膽固醇代謝過程；血紅蛋白代謝過程；核堿基、核苷和核苷酸代謝過程；嘌呤堿代謝過程；NF-κB 轉錄因子的激活；蛋白質同源四聚化；成骨細胞分化；正調控磷酸肌醇 3-激酶級聯反應；對維生素 E 的反應；對活性氧的反應；三酰甘油代謝過程；對高氧的反應；紫外線防護；過氧化氫分解代謝過程；抑製 NF-κB 轉錄因子；輸尿管芽發育；細胞分裂的正調控；對缺氧的反應；有氧呼吸; 嘌呤核苷酸分解代謝過程；蛋白質四聚化；細胞凋亡的負調控；老化 疾病：急性貧血 |
| NCBI總結： | 該基因編碼過氧化氫酶，這是人體抵禦氧化應激的關鍵抗氧化酶。過氧化氫酶是一種血紅素酶，存在於幾乎所有需氧細胞的過氧化物酶體中。過氧化氫酶將活性氧類過氧化氫轉化為水和氧氣，從而減輕過氧化氫的毒性作用。假設氧化應激在許多慢性或遲發性疾病的發展中起作用，例如糖尿病、哮喘、阿爾茨海默病、係統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎和癌症。該基因的多態性與過氧化氫酶活性降低有關，但迄今為止，無過氧化氫血症是已知由該基因引起的疾病。[由 RefSeq 提供，2009 年 10 月] |
| UniProt 代碼： | P04040 |
| NCBI GenInfo 標識符： | 115702 |
| NCBI 基因 ID： | 847 |
| NCBI 加入： | P04040.3 |
| UniProt 相關加入： | P04040 |
| 分子量： | |
| NCBI 全名： | 過氧化氫酶 |
| NCBI 同義詞全名： | 過氧化氫酶 |
| NCBI *符號： | 貓 |
| NCBI 蛋白質信息： | 過氧化氫酶 |
| UniProt 蛋白名稱： | 過氧化氫酶 |
| 蛋白質家族： | 過氧化氫酶 |
| UniProt 基因名稱： | 貓 |
| UniProt 條目名稱： | CATA_HUMAN |
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