Mohs IHC 程序

莫氏冷凍組織的標本製備

1. 將標本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內(nei) 。

2. 在 4-5 µm 處切割切片並安裝在帶正電的載玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 載玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 蓋間隙載玻片 (BSB 7006) 的下三分之一處。

3. 在室溫下風幹載玻片 2 分鍾，然後在培養(yang) 箱或幹浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鍾。

4. 在室溫下用丙酮或 10% NBF 固定 2 分鍾。如果使用 Bio SB Mohs ImmunoDigestor，使用 10% NBF 10% 會(hui) 產(chan) 生更好的形態。

5. 對於(yu) 固定在丙酮中的載玻片，讓它風幹。對於(yu) NBF 中的幻燈片，用蒸餾水衝(chong) 洗並風幹。

莫氏冷凍組織的預處理

1. 將載玻片轉移到 Immuno Washer、TBST 或 PBST 緩衝(chong) 液中。

2. 使用 Mohs ImmunoDigestor 進行 PIER、蛋白水解消化 1 分鍾。在室溫下。

3. 用 Immuno Washer、TBST 或 PBST 緩衝(chong) 液衝(chong) 洗。

IHC 檢測程序

1. PIER 後，將載玻片轉移至 Immuno 清洗機，靜置 1-2 分鍾。

2. 對於(yu) 手動染色，在環境溫度下進行抗體(ti) 孵育。對於(yu) 自動染色方法，請根據儀(yi) 器製造商的說明進行抗體(ti) 孵育。

3. 用 Immuno 洗滌器或去離子水清洗載玻片。

4. 繼續 IHC 檢測協議。用 Immuno 洗滌液在每個(ge) 步驟之間清洗載玻片。

縮寫(xie) Mohs PolyDetector DAB HRP Brown of HRP Green 免疫組化方案

1. 用過氧化物酶阻滯劑孵育載玻片 30 秒

2. 用緩衝(chong) 液（TBST 或 PBST）清洗

3. 與(yu) 一抗孵育 4 分鍾

4. 用緩衝(chong) 液（TBST 或 PBST）清洗

5. 用 HRP 標簽孵育 3 分鍾

6. 用緩衝(chong) 液（TBST 或 PBST）清洗

7. 準備

   • DAB Brown（在 1ml DAB 緩衝(chong) 液中加入 1 滴 DAB Chromogen；充分混合）

   • 或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）

8. 用 DAB 或 HRP Green 孵育 2 分鍾

9. 用緩衝(chong) 液（TBST 或 PBST）清洗

10. 用蘇木精或核固紅複染 30 秒

11. 用緩衝(chong) 液（TBST 或 PBST）清洗

12. 使用 AquaMounter 安裝或使用 Fast ChromoProtector 使組織脫水，然後使用 PermaMounter 安裝

此協議也可用於(yu) 使用檸檬酸鹽或 EDTA 檢索的 FFPE 組織。