上海起發jembio T4 聚合酶說明書

上海起發jembio T4 聚合酶說明書(shu)

T4 聚合酶 來源：大腸杆菌噬菌體(ti) T4描述：• 表現出5'->3' 聚合酶和3'->5' 核酸外切酶活性(1, 2)。• 將標記的核苷酸添加到 片段的凹陷 3' 末端。• 聚合酶需要存在單鏈 模板和引物。• 核酸外切酶比 聚合酶 I 中的更強，對單鏈 的活性高於(yu) 對雙鏈 的活性。• 超純重組酶。• 核酸外切酶活性可用於(yu) 從(cong) 雙鏈 的 3' 端去除一個(ge) 或幾個(ge) 核苷酸。• 酶適用於(yu) ：o 去除 3' 突出端以形成平端 (3,4)o 5' 填充以形成平端 (3,4)o 使用替代合成進行探針標記 (3,4)o 單鏈缺失亞(ya) 克隆 (5)o 定點誘變中的第二鏈合成 (6)單位定義(yi) ：一個(ge) 單位是在 37oC 下 30 分鍾內(nei) 催化 10 nmoles 總核苷酸摻入酸不溶性產(chan) 物的酶量。儲(chu) 存條件：儲(chu) 存於(yu) –20oC。儲(chu) 存緩衝(chong) 液：20 mM 磷酸鉀 (pH 6.5)、5 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油。測定條件：67 mM Tris-HCl（22oC 時 pH 8.8）、6.7 mM MgCl2、10 mM 二硫蘇糖醇、16.6 mM 硫酸銨、6.7 µM EDTA、20 µg 牛血清白蛋白、45 µg 活化小牛胸腺 和 0.033 mM dCTP 、dGTP、dTTP 和 [a-32P]dATP。在 100 µl (1) 的反應體(ti) 積中，在 37oC 下孵育 30 分鍾。質量控製：所有製劑都經過了汙染核酸內(nei) 切酶活性測試。參考：1. Goulian, M.、Lucas, ZJ 和 Kornberg, A. (1968) J. Biol。化學。243、627-638。2. Lehman, IR (1981) Enzymes 14, 51-65。3. Tabor, S. and Struhl, K (1989) in Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, FM, et al., eds) pp. 3.5.10-3.5.12, John Wiley&Sons, New York。4. Sambrook, J.、Fritsch, EF 和 Maniatis, T. (1989) 分子克隆：實驗室手冊(ce) ，第二版，第 5.44-5.47 頁，冷泉港。5. Dale, R.、McClure, B. 和 Houchins, J., (1985) Plasmid 13, 31-40。6. Kunkel, TA, Roberts, JD 和 Zakour, RA (1987) Methods Enzymol.154, 367-382。 T4 聚合酶是嗜中性聚合酶，表現出非常強的 3'->5' 核酸外切酶活性。