預塗層 96 孔微孔板

標準

標準稀釋緩衝(chong) 液

洗滌緩衝(chong) 液

檢測試劑A

檢測試劑B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB基板

停止解決(jue) 方案

封板機

37°C 培養(yang) 箱

多通道和單通道移液器和無菌移液器吸頭

噴瓶或自動微孔板清洗機

1.5 毫升試管

蒸餾水

吸水濾紙

100 毫升和 1 升量筒

酶標儀(yi) （波長：450 nm）

ELISA 搖床

1) 標準品：用推薦體(ti) 積的標準稀釋緩衝(chong) 液配製標準品，製成標準溶液。然後按照協議中的說明，使用標準稀釋緩衝(chong) 液對標準溶液進行係列稀釋。

2) 洗滌緩衝(chong) 液：按照方案中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩衝(chong) 液。

3) 檢測試劑製備：計算所需工作溶液的總體(ti) 積。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1:100 稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B。

1) 設置標準、測試樣品和對照孔。

2) 將 50 µl 稀釋的標準品分裝到標準孔中。

3) 將 50 µl 標準稀釋緩衝(chong) 液分裝到對照（零）孔中。

4) 將 50 µl 稀釋樣品分裝到樣品孔中。

5) 立即將 50 µl 檢測試劑 A 分裝到每個(ge) 孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時。

6) 洗滌 3 次。

7) 將 100 µl 檢測試劑 B 分裝到每個(ge) 孔中。在 37°C 下孵育 30 分鍾。

8)洗滌5次。

9) 將 90 µl TMB Substrate 分裝到每個(ge) 孔中。在 37°C 下孵育 10-20 分鍾。

10) 分裝 50 µl 終止液。

11) 在 450 nm 處測量 OD。

使用前將套件組件和樣品平衡至室溫 (18 - 25 °C)。建議為(wei) 每個(ge) 測試繪製標準曲線。

1. 在預塗板上分別設置標準孔、測試樣品孔和對照（零）孔，然後記錄它們(men) 的位置。建議至少測量每個(ge) 標準和樣品一式兩(liang) 份。

2. 將 50 µL 每種標準品、質控品和樣品加入相應的孔中。

3. 取下蓋子並丟(diu) 棄液體(ti) 。

4. 立即分裝 50 µl 檢測試劑 A 工作溶液。用蓋子密封板並在 37°C 下孵育 1 小時。

5. 取下蓋子並丟(diu) 棄溶液。用 1X 洗滌緩衝(chong) 液洗滌板 3 次。

6. 每孔加入 100 µL 檢測試劑 B 工作溶液，密封並在 37°C 下孵育 30 分鍾。

7. 棄去溶液並用洗滌緩衝(chong) 液洗滌板 5 次，如上一步所述。

8. 將 90 µl TMB Substrate 分裝到每個(ge) 孔中。用蓋子密封板並在 37°C 下孵育 10-20 分鍾。避免暴露在光線下。孵育時間僅(jin) 供參考，最佳時間應由最終用戶確定。不要超過 30 分鍾。

9. 每孔加入 50 µL 終止液。立即在 450 nm 處讀取。