evidentic 生物製劑藥物開發管道第 3 部分：潛在客戶生成和優化

一旦目標得到驗證，就決(jue) 定了所需的幹預類型。抗體(ti) 藥物通常靶向細胞表麵分子，例如細胞膜受體(ti) 或腫瘤抗原。單克隆抗體(ti) 藥物可以通過信號阻斷、免疫檢查點抑製或單克隆抗體(ti) 內(nei) 化等多種作用機製發揮其治療作用。此時要考慮的另一個(ge) 重要方麵是選擇可以提供所需治療效果的抗體(ti) 形式。考慮了幾個(ge) 參數，包括同種型（IgG、IgM 或 IgA）、人源化與(yu) *人、單價(jia) 與(yu) 多價(jia) 、單特異性與(yu) 雙特異性/多特異性、完整 Ig 與(yu) Ab 片段、偶聯物與(yu) 非偶聯物等。

早期的候選抗體(ti) 被稱為(wei) “命中"，由使用雜交瘤技術、噬菌體(ti) 展示或酵母展示平台生成的 mAb 克隆產(chan) 生。使用不同技術產(chan) 生的治療性抗體(ti) 候選者在成為(wei) 最終臨(lin) 床候選者之前通常會(hui) 經曆以下研發階段：

1. 基於(yu) 抗原結合能力的篩選

2. 基於(yu) 生物功能的命中表征和先導選擇

3. 鉛優(you) 化以增強安全性、有效性和可製造性之間的平衡

4. 臨(lin) 床候選人選擇

篩選

成功篩選 mAb 克隆需要高質量的試劑和經過充分驗證的功能分析。用於(yu) 檢測開發的常用試劑是 c、表達質粒、細胞係、純化蛋白、對照和參考抗體(ti) ，以及用於(yu) 測試物種交叉反應的目標直係同源物。篩選試驗通常包括初級、二級和三級試驗。初步篩選測定，通常是 ELISA，用於(yu) 識別命中並過濾掉與(yu) 目標靶標結合的抗體(ti) 。隨後，設計了二級測定（高通量）和三級測定（低通量）來評估候選抗體(ti) 的所需生物活性。例如，假設目標是識別阻斷特定配體(ti) 受體(ti) 信號通路的抗體(ti) 。在這種情況下，基於(yu) 板的配體(ti) /受體(ti) 結合 ELISA 可用作二級測定，而具有信號讀數的基於(yu) 細胞的配體(ti) /受體(ti) 結合測定可用作三級測定。

在這個(ge) 階段，參考抗體(ti) 、陽性對照抗體(ti) 和陰性對照抗體(ti) 的選擇至關(guan) 重要，因為(wei) 它們(men) 有助於(yu) 做出有效的決(jue) 定。合適的參考抗體(ti) 或陽性對照抗體(ti) 是檢測驗證的重要工具。參考抗體(ti) 可以是功能與(yu) 預期治療候選物相似的市售單克隆抗體(ti) 或從(cong) 公共領域中可用的序列重建的抗體(ti) 。參考抗體(ti) 也用於(yu) 體(ti) 內(nei) 概念驗證研究，以驗證目標或建立功效模型。同樣，用於(yu) 檢測的陰性對照抗體(ti) 也非常關(guan) 鍵。用於(yu) 基於(yu) 細胞的功能測定和體(ti) 內(nei) 的陰性對照 mAb功效研究必須是物種和同種型匹配的。

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線索選擇

先導選擇涉及嚴(yan) 格的多步驟篩選過程，以選擇與(yu) 預先確定的標準或關(guan) 鍵質量屬性(CQA) 相匹配的先導分子，以推進藥物開發的下一階段。首先，高級命中經過小規模表達和純化，以進行進一步的評估和表征。抗體(ti) 表征包括結構、生化、生物物理和功能特性。例如，分析旨在確定：

• 全抗體(ti) 序列和表位/CDR

• 哺乳動物表達係統的表達水平

• 配體(ti) 結合親(qin) 和力

• 翻譯後修飾

• 蛋白質聚集或碎裂

• 生物效應功能（ADCC、ADCP、CDC）

在這個(ge) 階段，不符合 CQA 標準的“命中"被消除（例如，次優(you) 的靶標結合親(qin) 和力、缺乏 ADCC 功能或較差的生化和/或生物物理屬性）。在體(ti) 外表征後，選擇的先導分子被表達和純化，用於(yu) 初步的體(ti) 內(nei) 功效測試。粗略的 PK/PD 和毒性研究可以與(yu) 相關(guan) 動物模型中的功效研究一起進行，以確認先導選擇。

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線索優化

選定的先導分子可能需要進一步的分子工程，以最大限度地提高治療效果和安全性，最大限度地降低免疫原性/毒性，並提高可製造性以成為(wei) 最終的臨(lin) 床候選者。該過程包括：

提高安全性

• 抗體(ti) 人源化

新一代治療性抗體(ti) 是具有低免疫原性的人源化或全人 Ig 序列。這意味著它們(men) 與(yu) 人類 Ig 序列更相似，因此會(hui) 在患者體(ti) 內(nei) 誘導低抗藥物抗體(ti) (ADA)反應，這可能會(hui) 影響治療效果。例如，在齧齒動物抗體(ti) （通過雜交瘤技術產(chan) 生）的情況下，>90% 的 IgG 序列被人 IgG 序列取代。計算機輔助設計、噬菌體(ti) 展示和酵母展示是廣泛使用的抗體(ti) 人源化方法。使用的一些流行軟件是 BioLuminate、MOE 和網絡服務器 Tabhu（抗體(ti) 人源化工具）

• 去免疫和耐受

其他因素，如表位序列、聚集、劑量、給藥途徑和靶點也可能有助於(yu) 治療性抗體(ti) 的免疫原性。去免疫是消除可引起免疫反應的抗原性表位，即T細胞、B細胞和MHC表位的過程。計算工具，例如來自 星的 Protean 3D，通常用於(yu) 預測查詢序列中的這些表位。此外，一種降低免疫原性的新方法是將 Treg 表位引入抗體(ti) 結構中，以刺激 Treg 細胞。

提高療效

• 親(qin) 和力成熟

該過程涉及將配體(ti) 結合親(qin) 和力提高到所需的親(qin) 和力範圍（通常為(wei) 0.1-10 nM）。例如，通常需要高結合親(qin) 和力來阻斷受體(ti) 信號級聯。此外，親(qin) 和力成熟有助於(yu) 減少與(yu) 其他相關(guan) 抗原的交叉反應，從(cong) 而減少脫靶毒性的機會(hui) 。成熟技術包括隨機誘變、靶向誘變、鏈改組和計算機內(nei) 方法（例如，BioLuminate）。

• Fc效應器功能

抗體(ti) 的 Fc 區可以引發免疫效應功能，例如抗體(ti) 依賴性細胞介導的細胞毒性 (ADCC)、抗體(ti) 誘導的補體(ti) 依賴性細胞毒性 (CDC) 和抗體(ti) 依賴性細胞介導的吞噬作用 (ADCP)。通過計算機內(nei) 設計、定點誘變和糖基修飾進行的 Fc 工程可改善效應器功能，尤其是在癌症治療中。相反，用於(yu) 自身免疫性疾病和炎症性疾病的抗體(ti) 藥物需要 Fc 突變來禁用 Fc-FcγR 相互作用。

增強可開發性功能

• 藥代動力學特性

藥代動力學改進旨在增加血清半衰期（允許低劑量）、增加給藥間隔、開發皮下製劑等。 Fc 區的特定突變已顯示降低非特異性清除（當非特異性內(nei) 化到細胞內(nei) 體(ti) 時）和抗原結合-介導的內(nei) 化和清除。例如，在中性 pH 條件下增加 Fc-FcRn 結合可使抗體(ti) 免於(yu) 降解。

• 藥物特性

理想的生物製劑必須具備高熱穩定性、高溶解度、高化學穩定性和低異質性。這些特性共同確保了抗體(ti) 在儲(chu) 存過程中的生物活性的成功保留、最小的聚集、更高的產(chan) 量、易於(yu) 配製和改進的製造質量控製。