​arthusbio甲硫氨酸說明書

arthusbio甲硫氨酸說明書(shu)

貨號：1K00201

規格： 96 tests

Detection range 15nM - 480n

arthusbio 1K00201

甲硫氨酸是一種具有硫甲基的氨基酸，通過甲硫氨酸腺苷轉移酶（EC 2.5.1.6）與(yu) ATP一起轉化為(wei) S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。SAM是50多種生物活性物質（如、RNA、蛋白質、磷脂、激素和神經遞質等）的甲基供體(ti) 。甲基在甲基轉移酶作用下從(cong) SAM轉移後，形成S-腺苷高半胱氨酸，去除腺苷後進一步代謝為(wei) 同型半胱氨酸（Hcy）。同型半胱氨酸通過N5甲基四氫葉酸甲基轉移酶（EC1.1.1.68）和輔酶維生素B12催化途徑從(cong) N5甲基四氫葉酸接受甲基代謝為(wei) 甲硫氨酸。這是蛋氨酸循環。

甲基化指數定義(yi) 為(wei) SAM和SAH的比率。甲基化指數\是甲基化狀態和甲基化能力的更好標記。

SAM用作治療抑鬱症、肝病、關(guan) 節炎和關(guan) 節痛等的藥物或營養(yang) 補充劑。

該免疫分析試劑盒用於(yu) 測量可溶性樣品中SAM的水平。

測定原理

這種直接競爭(zheng) ELISA（酶聯免疫吸附試驗）旨在測量樣品中S腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）的水平。將與(yu) 大分子偶聯的SAM固定在微量滴定板上。用移液管將標準品和樣品注入井中，

然後添加針對SAM的HRP結合抗體(ti) 。樣品或標準品中的遊離SAM分子與(yu) 微滴度板表麵上的固定化SAM競爭(zheng) 抗體(ti) 的結合位點。丟(diu) 棄混合溶液並清洗每個(ge) 孔後，添加TMB基質溶液。基質溶液在HRP（辣根過氧化物酶）的作用下變藍，添加停止溶液（酸）後變黃。顏色與(yu) 樣品（或標準品）中SAM的量成反比。使用微板分光光度計在450nm處測量剩餘(yu) 溶液（OD450）的光密度。樣品中SAM的水平可以通過標準品生成的標準曲線來計算。

樣品收集和儲(chu) 存

1、樣品采集必須在4℃下進行。必要時，通過離心去除沉澱，並盡快測試樣品或將其儲(chu) 存在-20°C或以下。避免重複凍融循環。

2.避免樣品中的NaN3，因為(wei) 它會(hui) 使辣根過氧化物酶（HRP）失活。

3、一些未知因素可能會(hui) 對測定產(chan) 生影響（基質效應）。用樣品稀釋劑稀釋樣品或用與(yu) 實際樣品基質相同的基質製備標準品/樣品，這應避免或減少基質效應。

程序

1、將所有試劑重新加熱至室溫，並充分混合。取出適當數量的井，將剩餘(yu) 的井放回

拉鏈。密封Ziploc並將其儲(chu) 存在-20°C。

2、向每個(ge) 孔中加入30ul樣品稀釋劑（空白孔）、標準品和樣品。

3、製備HRP結合抗體(ti) 溶液：用HRP抗體(ti) 稀釋液按1:600稀釋HRP抗體(ti) ，在wek內(nei) 用完。

如果一周後使用，請在需要時準備。充分混合並儲(chu) 存在黑暗中。

4、向每個(ge) 孔中加入70ul HRP結合抗體(ti) ，空白孔除外。

5、將平板置於(yu) 振蕩器上，搖動一段時間，使試劑混合，然後用微孔板封閉劑密封平板。將平板在37°C下培養(yang) 1小時。

6、小心剝離密封劑，並將剩餘(yu) 溶液丟(diu) 棄在孔中。在每個(ge) 孔中添加至少300ul洗滌液，並保持該狀態30秒，然後去除洗滌液。重複這些步驟3次以完成清洗過程。或者改用自動清洗機。

7、向每個(ge) 孔中添加TMB基質和100ul混合基質。輕輕搖晃並密封盤子。將培養(yang) 板在37°C下無光培養(yang) 15分鍾。

8、在反應結束時加入50ul停止溶液。

9.在15分鍾內(nei) 測量每個(ge) 孔在450 nm波長下的吸光度。根據空白井設置零。

數據處理

始終通過從(cong) 測試孔的吸光度中減去空白孔450 nm（OD450）處的吸光度來清除背景。

每個(ge) 孔（標準或樣品）的吸收率等於(yu) AAso，A是標準孔或樣品孔的平均吸光度，Aso是So標準孔的平均吸光度。創建標準曲線：通過繪製每個(ge) 標準品在y軸上的結合率與(yu) 其在x軸上濃度的對數來構建標準曲線。使用二次多項式曲線對數據進行傅立葉變換（r>0.99）。樣本的SAM水平可以通過將其結合率代入標準曲線方程來計算。如果樣品已稀釋，則乘以稀釋程度。

筆記

1、使用未重新加熱的試劑和樣品或環境溫度低於(yu) 20°C可能導致OD450值降低。

2、額外的幹燥後洗滌可能會(hui) 對結果產(chan) 生負麵影響，例如標準曲線和重複性較差。為(wei) 了避免這種情況，請在清洗後立即執行下一步。

3、充分混合溶液並*清洗，因為(wei) 這些程序會(hui) 影響分析。

4、用微板封閉劑密封板，孵育板時避光。

5、推薦標準品和樣品的重複井，建議標準曲線傅裏葉變換采用二次多項式（r>0.99）。這個(ge)

質控瓶的檢測濃度應在檢測範圍內(nei) 。

6、由於(yu) 基質效應，樣品孔的吸光度可能高於(yu) S0標準孔的吸光度。在這種情況下，將樣品稀釋至少十倍。如果在10倍稀釋後無法檢測SAM水平，則使用與(yu) 待測量樣品相同的矩陣來製備一組新的標準並再次測量。

7、濃縮洗滌液可能結晶。加熱，使鹽在稀釋前*溶解。

8、微孔板密封劑應一次性使用，以避免交叉汙染。

9、基板應避光。

10、停止溶液為(wei) 稀硫酸。避免直接接觸皮膚和其他物品。

存儲(chu) 和有效日期

儲(chu) 存條件：除HRP基質和停止溶液儲(chu) 存在2-8℃外，所有其他成分和板條均可冷凍儲(chu) 存。

有效期：自裝運之日起冰箱儲(chu) 存約6個(ge) 月。如果不打算很快使用，用戶可以將分析板，

HRP抗SAM抗體(ti) 、標準品、HRP抗體(ti) 和樣品稀釋液在冷凍櫃中儲(chu) 存更長時間或/和更好的結果。