arthusbio IK00301s說明書

arthusbio IK00301s說明書(shu)

S- Adenosyl-L-Homocysteine (SAH) ELISA Kit

(For Plasma, Serum or Tissue Samples)

目錄號IK00301s

包裝尺寸96測試

檢測範圍31.25 nM-1000 nM

目標詳細信息

甲硫氨酸是一種具有硫甲基的氨基酸，通過甲硫氨酸腺苷轉移酶（EC 2.5.1.6）與(yu) ATP一起轉化為(wei) S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。SAM是50多種生物活性物質（如、RNA、蛋白質、磷脂、激素和神經遞質等）的甲基供體(ti) 。甲基在甲基轉移酶作用下從(cong) SAM轉移後，形成S-腺苷高半胱氨酸，去除腺苷後進一步代謝為(wei) 同型半胱氨酸（Hcy）。同型半胱氨酸通過N5甲基四氫葉酸甲基轉移酶（EC1.1.1.68）和輔酶維生素B12催化途徑從(cong) N5甲基四氫葉酸接受甲硫氨酸代謝為(wei) 甲硫氨酸。這是蛋氨酸循環。

甲基化指數定義(yi) 為(wei) SAM和SAH的比率。甲基化指數是甲基化狀態和甲基化的更好標記

能力。

SAH和Hey連接了向關(guan) 鍵生物分子提供甲基乙氧基和從(cong) N-5甲基四氫葉酸中回收甲基乙氧基的過程。蛛網膜下腔出血的水平將決(jue) 定或反映蛋氨酸循環是否正常。因此，找到一種更好地量化它們(men) 的方法具有重要的實際意義(yi) 。SAH升高可導致血管內(nei) 皮細胞損傷(shang) ，這與(yu) 基因組甲基化水平有關(guan) 。蛛網膜下腔出血可能是動脈粥樣硬化的潛在生物標誌物。該免疫分析試劑盒用於(yu) 測量可溶性樣本中的SAH水平。

測定原理

這種直接競爭(zheng) ELISA（酶聯免疫吸附試驗）旨在測量樣品中S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAH）的水平。將與(yu) 大分子共軛的SAH固定在

微量滴定板。將標準品和樣品移液到孔中，然後添加抗SAH的HRP結合抗體(ti) 。樣品或標準品中的遊離SAH分子與(yu) 微滴度板表麵上的固定化SAH競爭(zheng) 抗體(ti) 的結合位點。丟(diu) 棄混合溶液並清洗每個(ge) 孔後，添加TMB基質溶液。基質溶液在HRP（辣根過氧化物酶）的作用下變藍，添加停止溶液（酸）後變黃。顏色與(yu) 樣品（或標準品）中的SAH量成反比。使用微板分光光度計在450nm處測量剩餘(yu) 溶液（OD450）的光密度。可以通過標準生成的標準曲線計算樣本中的SAH水平。

樣品收集和儲(chu) 存

1、樣品采集必須在4°C下進行。必要時，通過離心去除沉澱，並盡快測試樣品或將其儲(chu) 存在-20°C或以下。避免重複凍融循環。

2.避免樣品中的NaN3，因為(wei) 它會(hui) 使辣根過氧化物酶（HRP）失活。

3、試劑盒用於(yu) 血漿、血清或組織/細胞勻漿樣品。

程序

1、將所有試劑重新加熱至室溫，並充分混合。取出適當數量的井，將剩餘(yu) 的井放回Ziploc。密封Ziploc並將其儲(chu) 存在-20°C。

2、向每個(ge) 孔中加入50ul樣品稀釋劑（空白孔）、標準品和樣品。

3、製備HRP結合抗體(ti) 溶液：用HRP抗體(ti) 稀釋液按1:500稀釋HRP抗體(ti) ，一周內(nei) 用完。如果一周後使用，請在需要時準備。充分混合並儲(chu) 存在黑暗中。

4、向每個(ge) 孔中加入50ul HRP結合抗體(ti) ，空白孔除外。

5、將平板置於(yu) 振蕩器上，搖動一段時間，使試劑混合，然後用微孔板封閉劑密封平板。將平板在37°C下培養(yang) 1小時。

6、小心剝離密封劑，並將剩餘(yu) 溶液丟(diu) 棄在孔中。在每個(ge) 孔中添加至少300ul洗滌液，並保持該狀態30秒，然後去除洗滌液。重複這些步驟3次以完成清洗過程。或者改用自動清洗機。

7、向每個(ge) 孔中添加TMB基質和100ul混合基質。輕輕搖晃並密封盤子。將培養(yang) 板在37°C下無光培養(yang) 15分鍾。

8、在反應結束時加入50ul停止溶液。

9.在15分鍾內(nei) 測量每個(ge) 孔在450 nm波長下的吸光度。根據空白井設置零。

數據處理

始終通過從(cong) 測試孔的吸光度中減去空白孔450 nm（OD450）處的吸光度來清除背景。每個(ge) 孔（標準或樣品）的吸收率等於(yu) A/Aso，A是標準孔或樣品孔的平均吸光度，Aso是S0標準孔的平均吸光度。創建標準曲線：構建標準

通過繪製每個(ge) 標準品在y軸上的結合率與(yu)

其濃度在x軸上的對數。使用二次多項式曲線擬合數據（r>0.99）。通過將樣品的結合速率代入標準曲線方程，可以計算樣品的SAH水平。如果樣品已稀釋，則乘以稀釋程度。

筆記

1、使用未重新加熱的試劑和樣品或環境溫度低於(yu) 20°C可能導致OD450值降低。

2、額外的幹燥後洗滌可能會(hui) 對結果產(chan) 生負麵影響，例如標準曲線和重複性較差。為(wei) 了避免這種情況，請在清洗後立即執行下一步。

3、充分混合溶液並*清洗，因為(wei) 這些程序會(hui) 影響分析。

4、用微板封閉劑密封板，孵育板時避光。

5、推薦標準和樣品的重複井，建議標準曲線ftting采用二次多項式（>0.99）。質控瓶的檢測濃度應在檢測範圍內(nei) 。

6、濃縮洗滌液可能結晶。加熱，使鹽在稀釋前*溶解。

7、微孔板密封劑應一次性使用，以避免交叉汙染。

8、基板應避光。

9、停止溶液為(wei) 稀硫酸。避免直接接觸皮膚和其他物品。

存儲(chu) 和有效日期

儲(chu) 存條件：除HRP基質和停止溶液儲(chu) 存在2-8°C外，所有其他成分和板條均可冷凍儲(chu) 存。

有效期：自裝運之日起冰箱儲(chu) 存約6個(ge) 月。如果不打算很快使用，用戶可以將分析板、HRP抗SAM抗體(ti) 、標準品、HRP抗體(ti) 和樣品稀釋液放在冷凍櫃中，以獲得更長的儲(chu) 存時間或/或更好的結果。