線性聚乙烯亞胺PEI MW25000說明書

線性聚乙烯亞(ya) 胺PEI MW25000說明書(shu)

上海起發生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬於(yu) 菲律宾新利官网开户（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌，打造優(you) 質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產(chan) 業(ye) 鏈中的國產(chan) 生物試劑品質關(guan) 。未來讓每一個(ge) 和我們(men) 一樣擁有民族情懷的企業(ye) ，共同創世界優(you) 秀的中國生物製造企業(ye) ，圓夢中國。

產(chan) 品詳情

產(chan) 品描述

BIOHUB 線性聚乙烯亞(ya) 胺PEI MW25000 轉染試劑係列是基於(yu) 聚乙烯亞(ya) 胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chan) 品，因其較高的轉染效果，已廣泛應用於(yu) AAV，LV和重組蛋白等工業(ye) 化生產(chan) 。

聚乙烯亞(ya) 胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔兩(liang) 個(ge) 碳原子，即每第三個(ge) 原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"體(ti) (proton sponge)，因此，非常容易結合帶負電荷的核酸分子，形成帶正電荷的複合物顆粒，該顆粒與(yu) 細胞表麵陰離子結合，很容易通過內(nei) 吞作用進入細胞；並且可抵禦溶酶體(ti) 的降解作用，從(cong) 而提高核酸分子的表達水平。

基本信息

CAS：9002-98-6

分子式：(CH2CH2NH)n

分子量：25000

熔點：73-75℃

溶解性：溶於(yu) 熱水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；

不溶於(yu) ：苯、C2H5OC2H5、丙酮

形式：白色固體(ti)

生物毒性： 未知

安全防護： 手套及口罩

存儲(chu) ： PEI 內(nei) 含自由氨基，建議開封後 4℃幹燥保存，減緩氧化過程。

效期：3年

運輸：常溫

特點：大量實驗數據反饋，細胞通用性好，有非常好的轉染效果，尤其對293，CHO細胞係有特別顯著的轉染效果。

配置方法

轉染操作流程：(貼壁細胞轉染方法)

   1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細 胞並計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yang) 的器皿，每個(ge) 孔置 入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

   2. 準備 -PEI 複合物： 、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升 至室溫。依據表 1 所示，用 Opti-MEM ITM或其他適合的無蛋白培 養(yang) 基稀釋適量 。用同樣的培養(yang) 基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg 需用 1-5 μL 線 性 PEI 轉染試劑(這個(ge) 需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批 比例可 能會(hui) 稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有 溶液的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉染 試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻後，室溫靜置 10~25 min 以形成 -PEI 複合物。當溶液體(ti) 積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

   3. 轉染細胞： 直接向每個(ge) 孔中加入 -PEI 複合物並輕輕渦旋培養(yang) 板/培養(yang) 皿。在 無血清條件下轉染時，去除生長培養(yang) 基，替換成無血清培養(yang) 基，然後滴 -PEI 複合 物。轉染 3 h 後，添加½體(ti) 積的包含 30%血清的生長培養(yang) 基。

   4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2 培養(yang) 箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染 後最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。

   5. 轉染 24 h 後，將細胞傳(chuan) 代至新鮮的生長培養(yang) 基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2 培養(yang) 箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與(yu) 轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養(yang) 基。

轉染操作流程：(懸浮細胞轉染方法)

   1. 轉染前準備：懸浮細胞傳(chuan) 代接種於(yu) 適量含懸浮細胞生長培養(yang) 基中，合適條件下培養(yang) 。根據培養(yang) 瓶大小調整細胞密度（例100mL培養(yang) 瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然後旋緊瓶口放入搖床繼續培養(yang) ，2~4小時後可以進行轉染。

   2. 準備 -PEI 複合物：、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yang) 基稀釋適量 。用同樣的培養(yang) 基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻後，室溫靜置 10~25 min 以形成 -PEI複合物。當溶液體(ti) 積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

   3. 轉染細胞：將PEI-轉染複合物逐滴加入到細胞培養(yang) 液中，搖勻後旋緊瓶口放回搖床合適培養(yang) 條件下培養(yang) 至可以分析檢測。

   4. 孵育細胞和分析結果：轉染後一般24-72h即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

   5. 如果要獲得更多的蛋白產(chan) 量，有文獻表明轉染後24小時，可以適當稀釋細胞，稀釋比例參考範圍（1:1—1:5）之間，可以增加蛋白產(chan) 量，稀釋效應與(yu) 最佳稀釋比率應根據經驗確定。

產(chan) 品背景

    BIOHUB 生產(chan) 的78Bio PEI是一種優(you) 化的線性陽離子聚合物轉染試劑,分子量分別為(wei) 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉染效率高，但毒性也略大於(yu) 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達係統中，相比於(yu) 市麵上的脂質體(ti) 78BioPEI 都表現出高的蛋白表達量（無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器），以及更小的細胞毒性、更高的轉染效和更高的可 重複性，並且十分經濟的高性價(jia) 比轉染試劑。產(chan) 品具有以下特點：

1.轉染效率高，細胞毒性低；  蛋白表達量高；

2.節約成本：BIOHUB 78 PEI轉染試劑 ，進口品質，親(qin) 民價(jia) 格，至少能夠降 40% 的轉染試劑總成本；

3.適用於(yu) HEK293 等真核細胞的轉染；

4.適用於(yu) 貼壁細胞和懸浮細胞的轉染；

5.適用於(yu) 有血清和無血清的轉染條件；

6. 無機試劑，無動物源成分；

7. 產(chan) 品穩定，質控嚴(yan) 格；

8. 工藝流程適用範圍廣，容易優(you) 化 適合小規模培養(yang) 板，培養(yang) 瓶到大規模的生物反應器。

產(chan) 品反饋

注意事項

 1. 為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

 2. 本產(chan) 品主要用於(yu) 科研領域，不宜用於(yu) 臨(lin) 床診斷或其他用途。

 3.加熱或加酸都有助於(yu) 78BioPEI 溶解。當然酸可能不用加那麽(me) 多，詳細用量可試加一點 ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那麽(me) 低。

 4.一定要溶解充分，溶解不充分會(hui) 影響後續的轉染效率.

 5.冷凍後可能會(hui) 影響其後續轉染效果。

 特別提醒：初次使用 78PEI 進行不同基因轉染時應先做預試，優(you) 化出適合自己實驗的， 最佳 PEI 和 的比例，通常篩選範圍在 1:1 到 5:1 之間，如果之前用過Polysciences品牌的 PEI，我們(men) 的活性是其1.5倍左右，用 78BioPEI 時應適當降低使用濃度。