脂質過氧化傳感器C11-BODIPY 581/591說明書

脂質過氧化傳(chuan) 感器C11-BODIPY 581/591說明書(shu)

上海起發生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬於(yu) 菲律宾新利官网开户（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌，打造優(you) 質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產(chan) 業(ye) 鏈中的國產(chan) 生物試劑品質關(guan) 。未來讓每一個(ge) 和我們(men) 一樣擁有民族情懷的企業(ye) ，共同創世界優(you) 秀的中國生物製造企業(ye) ，圓夢中國。
產(chan) 品詳情

產(chan) 品描述

一、 化學結構：

二、 檢測原理：

C11-BODIPY 581/591 是一種新型的對 Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質過氧化傳(chuan) 感器，與(yu) 其他 ROS 捕獲探針不同之處在於(yu) ，C11-BODIPY 581/591 具有好的親(qin) 脂性可以快速入膜，隨後可以選擇性的對細胞內(nei) 和細胞膜中的脂質過氧化(Lipid ROS)進行捕獲，並在氧化後仍保持親(qin) 脂性，不會(hui) 離開脂質膜，該過程同時伴隨熒光信號變化。多用於(yu) 熒光顯微鏡、流式細胞分析等對 Lipid ROS 的可視化監測。C11-BODIPY 581/591 結構中多不飽和丁間二烯基在 Lipid ROS 催化氧化後，其熒光發射峰從(cong)  590 nm偏移至 510 nm。

實驗步驟

1. 樣品溶解：

商品開封後，離心機輕甩；隨後加入適量 DMSO 進行溶解，溶解度至少可達 25mg/mL。溶解後建議分裝-20℃避光保存，盡量避免反複凍融，防止吸潮。

【注】：樣品輕甩目的是為(wei) 了避免痕量的探針吸附管壁損失樣本。

2. 樣品使用：

1) 流式細胞分析：

懸浮細胞：800 g 離心 5 min 收集細胞沉澱；隨後 PBS 洗滌細胞兩(liang) 遍。貼壁細胞：棄培養(yang) 液，用常溫 PBS 或培養(yang) 液輕洗細胞 2 次，隨後胰酶消化，800g 離心 5 min 收集細胞沉澱，隨後 PBS 洗滌細胞兩(liang) 遍，每個(ge) 樣本收集 1~5 ×105 個(ge) 細胞。(注意：操作過程中輕柔吹打細胞， 消化時間不宜過長，劇烈吹打或胰酶消化過度會(hui) 影響實驗結果)

C11-BODIPY 581/591 用於(yu) 脂質過氧化檢測的推薦濃度為(wei) 終濃度 5μM；配製方法：用新鮮空白培養(yang) 液配製終濃度為(wei)  5μM 的C11-BODIPY 581/591 染色液待用，DMSO 含量≤5‰。(注意：該步操作建議在消化細胞前準備好，以免細胞消化後久置影響實驗結果)

將事先配置好的脂質過氧化染色液加入收集的細胞沉澱中，推薦體(ti) 積為(wei)  500μL，隨後置於(yu)  37℃孵箱， 染色 30min，期間 5-10min 間隔輕彈細胞使其懸浮保證染色更充分。

染色結束後，800 g 離心 5 min，棄上清，隨後用PBS 清洗細胞 2 次，加入 200μLPBS 重懸細胞用於(yu) 流式分析。

2） 原位成像：

接種適當密度的細胞於(yu)  20mm 規格的蓋玻片上（也可用共聚焦小皿替代），給予實驗藥物處理適當時間後，吸去培養(yang) 液，用 PBS 洗滌細胞一遍加入 500 μL 配製好的脂質過氧化染色液，於(yu)  37℃染色 30min；（配製方法參考流式分析中的染色液配製）棄培養(yang) 液，PBS 洗滌細胞兩(liang) 遍後熒光顯微鏡或激光共聚焦下進行成像檢測。細胞在染色後應在 1 h 之內(nei) 完成檢測。

3）檢測條件：

該分子探針在還原狀態下最佳激發波長為(wei)  581 nm, 發射為(wei)  591nm；被 Lipid ROS 氧化後最佳激發波長為(wei)  500 nm，發射在 510nm。因此，在流式分析中檢測通道為(wei)  FL1-A；激光共聚焦檢測：氧化態激發波長可選488nmFITC）通道；還原態激發波長可選 561 nm（TRITC）通道。

實驗案例分析

流式分析實驗範例：

使用本試劑檢測 10 μM RSL3（鐵死亡經典誘導劑）處理 A549 細胞 24 h 後的細胞脂質過氧化水平的流式檢測

原位成像實驗範例：

下圖為(wei)  RSL3（10 μM）處理A549 細胞 24 h 後，使用本試劑（5μM）對活細胞中脂質過氧化水平進行原位染色後激光共聚焦成像結果。

注意事項

1. 此試劑盒僅(jin) 供科研使用。

2. 使用前小心離心數秒取用，需佩戴手套操作，注意避免與(yu) 皮膚、眼睛和黏膜接觸。

3. 本試劑盒可用檢測活細胞中 Lipid ROS 水平，用於(yu) 評價(jia) 細胞鐵死亡狀態。