CCK-8細胞活性檢測試劑盒說明書

CCK-8細胞活性檢測試劑盒說明書(shu)

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產(chan) 品詳情

  產(chan) 品描述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞活性檢測試劑盒是一種廣泛應用於(yu) 細胞增殖和細胞毒性相關(guan) 實驗的快速、高靈敏度檢測試劑盒。

CCK-8 的主要成分為(wei) 水溶性四唑鹽[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，Water Soluble Tetrazolium-8是一種類似於(yu) MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體(ti) 內(nei) 的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臢（Formazan，參考圖1)。

Water Soluble Tetrazolium-8被細胞內(nei) 脫氫酶生物還原後生成的甲臢能夠直接溶解在培養(yang) 基中。活細胞的數目越多，則顏色越深。對於(yu) 同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線性關(guan) 係。

圖1. Water Soluble Tetrazolium-8分子結構及CCK-8檢測原理

產(chan) 品特點

1.   MTT 法生成的甲臢不是水溶性的，需要使用DMSO 等有機溶劑溶解；而CCK-8 產(chan) 生的甲臢是水溶性的，省去了溶解步驟，因此減少了該操作步驟帶來的實驗誤差。

2.   由於(yu) CCK-8 產(chan) 生的甲臢是水溶性的，無需吸掉培養(yang) 基後，再用DMSO 等有機溶劑溶解，非常適合用於(yu) 懸浮細胞的活性測定。

3.   與(yu) MTT 方法相比，CCK-8 法線性範圍更寬，靈敏度更高。

4.    CCK-8 法對細胞無毒性，可以多次測定，選取最佳測定時間。

5.    CCK-8 法無需配製，即開即用。

6.   CCK-8 法適合大規模、高通量的樣品檢測。

使用方法

使用方法

1.   在96 孔板中配製100 μL 的細胞懸液。將培養(yang) 板在培養(yang) 箱預培養(yang) 24 小時（在37℃，5% CO₂的條件下）。

2.    向培養(yang) 板加入10 μL 的待測藥物進行處理。

3.  根據實驗需要，將培養(yang) 板在培養(yang) 箱孵育一段時間 （例如：6, 12，24 或48 小時）。

注：如果不進行藥物處理而直接測定細胞的活性，則不需要2-3 步驟，直接從(cong) 第4 步操作。

4.    向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們(men) 會(hui) 影響O.D 值的讀數）。

5.   將培養(yang) 板在培養(yang) 箱內(nei) 孵育2-4 小時。

6.   用酶標儀(yi) 測定在450 nm 處的吸光度。

7.   如果暫時不測定OD 值，可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v） 溶液或者 0.1 M HCl 溶液，並蓋上培養(yang) 板蓋子，在室溫條件下避光保存。24 小時內(nei) 吸光度不會(hui) 發生變化。

實驗案例分析

圖2. 本實驗結果證明：上海起發CCK8與(yu) 同仁CCK8的測試效果幾乎相同。

注意事項

1.     由於(yu) 96 孔板周圍一圈最容易蒸發，周圍一圈建議不用，改加PBS或水。

2.    CCK-8 檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應。如果待測體(ti) 係中存在還原劑（例如一些抗氧化劑），可能會(hui) 幹擾檢測結果，需設法去除其影響。

3.  當使用標準96 孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為(wei) 1,000 個(ge) /孔 (100 μL 培養(yang) 基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低於(yu) 2,500 個(ge) /孔 (100 μL培養(yang) 基)，且加入CCK-8後孵育的時間長一些。

4.   如果細胞培養(yang) 時間較長，培養(yang) 基顏色發生變化，應洗滌細胞更換培養(yang) 基後再加CCK-8 檢測。

5.   酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養(yang) 基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除隻含有培養(yang) 基的對照孔中本底的吸光度而消除，因此不會(hui) 對檢測結果造成影響。