慢病毒濃縮試劑（5x）說明書

慢病毒濃縮試劑（5x）說明書(shu)

上海起發生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬於(yu) 菲律宾新利官网开户（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌，打造優(you) 質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產(chan) 業(ye) 鏈中的國產(chan) 生物試劑品質關(guan) 。未來讓每一個(ge) 和我們(men) 一樣擁有民族情懷的企業(ye) ，共同創世界優(you) 秀的中國生物製造企業(ye) ，圓夢中國。

產(chan) 品詳情

產(chan) 品描述

慢病毒濃縮試劑（5x）是針對慢病毒富集而優(you) 化的聚合物材料，它提供了一種簡單、快速、高效的慢病毒顆粒濃縮方法。隻需將慢病毒上清液與(yu) 慢病毒濃縮試劑按比例混合，短時間孵育，采用標準離心機進行離心即可得到慢病毒顆粒沉澱。超濾、超速離心法等病毒濃縮法，操作時間長，步驟繁瑣，且通常會(hui) 有細胞碎片和血清蛋白等的汙染，病毒純度低。使用本產(chan) 品進行病毒濃縮後，病毒滴度可提高10-100倍，病毒回收率最高可達約90%，病毒損失少，並且病毒在濃縮過程中能保持病毒生物活性。整個(ge) 實驗過程可在4小時內(nei) 快速完成，無需超速離心即可獲得出色的回收效率。

產(chan) 品特點

　簡單快速——操作簡單，無需超速離心，確保活性，實驗耗時不超過4小時

　　濃縮效果優(you) ——病毒滴度可濃縮10-100倍以上

　　回收效率高——慢病毒回收效率高達90%以上

　　應用範圍廣——適用於(yu) 所有類型的慢病毒顆粒

使用方法

使用方法

1.將含有慢病毒顆粒的培養(yang) 基轉移至無菌容器中，300xg離心10分鍾以除去細胞碎片。

　　Ø為(wei) 保證病毒活性，濃縮前的病毒上清液應盡量選擇新鮮收集的病毒原液。

　　2.使用0.22μm過濾器過濾上清液至無菌容器中。

　　Ø如果使用濾膜過濾，推薦使用低蛋白結合力的纖維素醋酸酯或聚醚碸（PES）膜，不推薦使用硝酸纖維素膜（NC）。

　　3.向每4體(ti) 積含慢病毒的上清液中加入1體(ti) 積慢病毒濃縮試劑（5x），使慢病毒濃縮試劑（5x）稀釋為(wei) 工作濃度（1x）。

　　4.將上述混合物於(yu) 4℃搖床中慢速孵育3小時或過夜。

　　Ø慢病毒顆粒在4℃可穩定長達4天。

　　5.將混合物4℃4000xg離心25分鍾。離心後，慢病毒顆粒可能在容器底部顯示為(wei) 米色或白色沉澱。

　　6.小心棄去上清液，4℃4000xg離心5分鍾，再次棄盡殘餘(yu) 液體(ti) ，應盡量避免吸走沉澱物，該沉澱物即為(wei) 慢病毒顆粒。

　　7.用初始體(ti) 積（原上清液體(ti) 積）1/10-1/100預冷的慢病毒保存液重懸病毒顆粒，使用移液器小心吹打，重懸慢病毒顆粒。

　　Ø重懸病毒沉澱時，吹打操作要輕柔，可選擇慢病毒保存液（LS110R）、Complete medium或FBS重懸慢病毒。

　　8.小體(ti) 積分裝慢病毒，儲(chu) 存於(yu) -80℃冰箱或液氮中，留取少量病毒測定滴度。

　　Ø應盡量避免慢病毒反複凍融，否則會(hui) 降低病毒滴度。

實驗案例分析

注意事項

　1.為(wei) 了您的健康安全，請規範操作，穿戴實驗服與(yu) 手套開展實驗；

　　2.所有慢病毒操作均需在生物安全櫃（BSL2級）中進行；

　　3.本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，請勿用於(yu) 臨(lin) 床診斷及治療。

運輸及保存方法

冰袋（wetice）運輸。4℃保存，有效期12個(ge) 月。

產(chan) 品描述

細胞周期（cell cycle）是指連續分裂的細胞從(cong) 一次分裂完成開始到下次分裂為(wei) 止的全過程，分為(wei) 間期和分裂期（M期），細胞間期又分為(wei) 休眠期（G0期）,合成前期（G1期），合成期（S期），合成後期（G2期）整個(ge) 周期可以表示為(wei) ：G0-G1-S-G2-M。

本公司生產(chan) 的細胞周期檢測是通過經典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining，PI staining)方法進行周期分析的檢測試劑盒。PI是一種的熒光染料，可以結合雙鏈產(chan) 生熒光，其熒光強度與(yu) 的含量成正比。經碘化丙啶染色後假設G0/G1期細胞的熒光強度為(wei) 1，那麽(me) 含有雙份基因組的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為(wei) 2，正在進行複製的S期細胞的熒光強度為(wei) 1-2之間。凋亡細胞由於(yu) 細胞核發生濃縮以及發生片段化導致部分基因組片段在染色過程中丟(diu) 失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色後呈現明顯的弱染，即熒光強度小於(yu) 1，在流式檢測的熒光圖上出現所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。利用流式細胞儀(yi) 進行熒光分析從(cong) 而對進行定量，實現細胞周期檢測。

產(chan) 品組成

本試劑盒常用於(yu) 貼壁細胞或者懸浮細胞的培養(yang) ，如果檢測對象為(wei) 組織樣品，必須消化成單個(ge) 細胞後在進行染色檢測，規格為(wei) 50T，每T可檢測的樣本的細胞數量在10-100萬(wan) 之間。

運輸與(yu) 保存

冰袋運輸，-20℃保存一年。

實驗步驟

1. 細胞樣品的準備：

a. 對於(yu) 貼壁細胞：收集培養(yang) 液上清，PBS潤洗細胞一遍，胰酶消化細胞，加入前麵收集的培養(yang) 液終止消化，得到的細胞懸液1000g離心5min收集細胞沉澱備用。

b. 對於(yu) 懸浮細胞：1000g左右離心3-5 min，沉澱細胞。

（如果細胞沉澱不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力）

2.細胞固定：

（1）向步驟1收集得到的沉澱中加入300 μL預冷的PBS，輕柔吹打混勻，輕柔渦旋的過程中滴加700 μL預冷的無水乙醇，最後於(yu) 4℃固定30 min或更長時間。通常固定2 h或以上更能保證染色效果，固定12-24h可能效果更佳。

（2）1000g左右離心5 min去除固定液，預冷PBS清洗一遍後再次離心，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

3. 細胞染色：

（1）參考下表配製碘化丙啶染色液（配置好的碘化丙啶染色液4℃保存，宜當日內(nei) 使用）：

（2）每個(ge) 樣品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液緩慢並充分重懸細胞沉澱， 37ºC避光孵育30min。隨後可以4ºC或冰浴避光存放。染色完成後宜在24 h內(nei) 完成流式檢測。

4.流式檢測分析：檢測激發波長為(wei) 488 nm處紅色熒光，用流式細胞儀(yi) 對含量進行分析，確定細胞周期變化情況。

注意事項

（1）需自備PBS和70%乙醇，整個(ge) 過程避光操作。

（2）為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套。

（3）本產(chan) 品僅(jin) 作科研用途！