AHARIBO Protein System 360：解析新生蛋白質合成動態，開啟精準研究新時代

產(chan) 品名稱: AHARIBO PROTEIN System 360 (12 rxns)

品牌: immaginabiotech

規格：12 rxns

適用物種：真核細胞係

起始量：10萬(wan) 細胞

介紹：用於(yu) 快速分離和分析新合成蛋白質。通過AHARIBO Protein 360技術，您可在活躍的翻譯過程中使用疊氮高丙氨酸（AHA）標記新生蛋白質，並利用磁珠進行分離。隨後，隻需將樣本寄送至我方實驗室，我們(men) 將通過液相色譜-質譜聯用（LC-MS）技術進行鑒定。數周內(nei) ，您將收到一份綜合報告，其中包含樣本中檢測到的所有新合成蛋白質的詳細信息。

操作流程：

1、樣本製備

無甲硫氨酸培養(yang) 基培養(yang) -> AHA標記 -> 細胞裂解。

2、蛋白質下拉實驗

磁珠孵育 ->磁珠洗滌。

3、肽段定量與(yu) 鑒定

磁珠酶解 ->LC-MS->數據分析。

概念驗證研究

AHARIBO蛋白360成功分離AHA標記肽段

AHA標記K562細胞（AHA+）與(yu) 未標記細胞（AHA-）的下拉效率對比

在LC-MS生成的譜圖中，AHA+樣本顯示出顯著的信號富集，證實AHARIBO介導的下拉技術對AHA標記肽段具有高度特異性。

案例研究：

Torin 2治療應用

Torin 2作為(wei) mTOR通路抑製劑，通過阻斷mTOR激酶活性調控蛋白質合成。本研究采用AHARIBO蛋白技術檢測Torin 2誘導的翻譯抑製效應：將K562細胞分為(wei) 實驗組（AHA孵育期間添加100 nM Torin 2處理1小時）與(yu) 對照組（僅(jin) AHA孵育），經肽段下拉技術富集AHA標記的新合成肽段後，通過LC-MS進行定量蛋白質組學分析。

應用方向

1.蛋白質合成機製研究

動態追蹤疾病模型（如癌症、神經退行性疾病）中新生蛋白的時空表達特征。

驗證mRNA翻譯效率差異，解析非編碼RNA對蛋白質合成的調控作用。

2.藥物靶點發現與(yu) 驗證

篩選小分子化合物對特定通路蛋白合成的抑製/激活效應（如抗癌藥物對癌基因產(chan) 物合成的阻斷）。

監測抗體(ti) 藥物誘導的B細胞受體(ti) （BCR）信號通路相關(guan) 蛋白的快速合成。

3.翻譯後修飾（PTM）分析

結合磷酸化蛋白質組學，研究激酶活性與(yu) 新生蛋白磷酸化的協同調控。

探索新生蛋白的糖基化修飾模式對免疫原性的影響（如疫苗研發）。

4.病毒學與(yu) 感染機製

定量宿主細胞在病毒感染後的抗病毒蛋白（如幹擾素誘導蛋白）合成動力學。

鑒定病毒劫持宿主翻譯機器的關(guan) 鍵宿主因子（如新冠病毒的ORF1ab蛋白相互作用網絡）。

5.合成生物學與(yu) 蛋白質工程

優(you) 化人工合成基因的翻譯效率，篩選高表達工程蛋白的宿主細胞係。

研究稀有密碼子對新生蛋白折疊速率的影響（如熒光蛋白變體(ti) 的快速篩選）。

注意事項

1.實驗安全規範

試劑盒含同位素標記成分（如L-賴氨酸-¹³C₆¹⁵N₂），需嚴(yan) 格遵守放射性/穩定性同位素操作規程，避免交叉汙染。

實驗區域應配備通風櫥及專(zhuan) 用耗材，廢棄物需按生物危害品處理。

2.樣本適用性限製

僅(jin) 支持真核細胞係（如HEK293、Jurkat等），不適用於(yu) 原代細胞、組織樣本或微生物（除非提前驗證）。

細胞活性需＞80%，避免使用凍存或凋亡細胞，以免影響標記效率。

3.操作關(guan) 鍵控製點

嚴(yan) 格遵循代謝標記時間窗口（通常為(wei) 4-6小時），過長可能導致代謝平衡破壞。

磁珠純化步驟需充分震蕩混勻，避免因結合效率不足導致假陰性結果。

4.數據分析前提條件

需提供細胞培養(yang) 基成分說明（如是否含血清），避免外源性肽段幹擾。

建議同步設置陰性對照（未標記細胞）和陽性對照（已知高表達蛋白），提升數據可信度。

5.法規與(yu) 兼容性

數據僅(jin) 限科研用途，若涉及臨(lin) 床樣本需另行倫(lun) 理審批。

兼容主流質譜儀(yi) （如Thermo Orbitrap、AB Sciex TripleTOF），但需提前確認儀(yi) 器參數適配性。

常見問題

Q1：係統是否適用於(yu) 原代細胞或臨(lin) 床樣本？

A：當前版本主要針對永生化真核細胞係（如HEK293、HeLa）優(you) 化。若需擴展至原代細胞或組織樣本，需提前聯係技術團隊評估可行性。

Q2：LC-MS分析是否需要額外付費？

A：12次反應套餐已包含基礎LC-MS服務（含數據報告）。如需高分辨率質譜（如Orbitrap）或深度覆蓋分析，可升級套餐（報價(jia) 詳詢銷售）。

Q3：如何保證實驗數據的準確性？

A：係統內(nei) 置三重質控：

同位素標記效率驗證（CV<5%）；

陽性對照肽段（如β-actin）內(nei) 參校正；

數據庫匹配率閾值設定（≥95%置信度）。

Q4：是否支持多組學聯合分析？

A：可與(yu) 轉錄組、磷酸化蛋白質組數據整合，提供定製化多組學分析報告（需額外付費）。

注：該說明僅(jin) 供參考，最終請immaginabiotech品牌說明書(shu) 為(wei) 準。

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