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MethylEasy™ 亞硫酸氫鹽修飾技術

　發布時間：2018/6/28　點擊量：680

Genetic Signatures成立於(yu) 2001年，由Geoffrey Grigg博士（原澳大利亞(ya) 聯邦科學與(yu) 工業(ye) 研究組織（CSIRO）分子生物學部主任）創立。甲基化分析中使用廣泛的方法是亞(ya) 硫酸氫鹽法，由Grigg博士在英國劍橋設想，並被減少到CSIRO實驗室的實踐中[1]。初的方法隨後得到改進，這些改進導致了遺傳(chuan) 簽名MethylEasy™亞(ya) 硫酸氫鈉修飾產(chan) 品係列的開發和發布。

由於(yu) 改進的轉化方法和用於(yu) 胞嘧啶甲基化檢測的應用，發現了一個(ge) 有趣的發現：通過亞(ya) 硫酸氫鈉處理微生物能夠將四種核酸堿基還原成僅(jin) 三個(ge) 堿基，通過將胞嘧啶轉化為(wei) 胸腺嘧啶。該技術被稱為(wei) 3base ™，是我們(men) 的EasyScreen ™病原體(ti) 檢測試劑盒的基石。

此後，遺傳(chuan) 標誌開發並商業(ye) 化了一套基於(yu) EasyScreen ™實時PCR的產(chan) 品，用於(yu) 常規檢測傳(chuan) 染病。EasyScreen ™產(chan) 品為(wei) 醫院和病理實驗室提供了分子工具，可在快速高通量的環境中篩查各種傳(chuan) 染性病原體(ti) 。

 

MethylEasy™ 亞硫酸氫鹽修飾技術

亞(ya) 硫酸氫鹽修飾方法

圖1 亞(ya) 硫酸氫鹽修飾方法在20世紀90年代初之前，很少有技術能夠評估個(ge) 體(ti) CpG位點水平的基因組中的甲基化模式，並且大多數這些技術需要相對大量的起始（高達10μg）。這一難題被GW Grigg博士構想的亞(ya) 硫酸氫鹽修飾方法的出現所克服，並由D Millar博士（現為(wei) 遺傳(chuan) 簽名有限公司科學家）與(yu) M Frommer博士及其同事[1]共同實踐。

用於(yu) 測定分子中胞嘧啶殘基的甲基化狀態的亞(ya) 硫酸氫鹽方法取決(jue) 於(yu) 亞(ya) 硫酸氫鹽與(yu) 單鏈中的胞嘧啶的反應。胞嘧啶轉化為(wei) 尿嘧啶，而5-甲基胞嘧啶（5-mC）不反應（見圖1和參考文獻2）[2]。可以通過使用聚合酶鏈式反應（PCR）來擴增經修飾的鏈，並且可以直接測序，或克隆並測序以從(cong) 單個(ge) 分子產(chan) 生甲基化數據。

遺傳(chuan) 簽名有限公司發明了一種新的亞(ya) 硫酸氫鹽修飾方法，該方法顯著提高了修飾分析的產(chan) 率和效率。該MethylEasy™ 亞(ya) 硫酸氫鹽改性技術已發展為(wei) 這一創新的結果。

先前的修飾方法
用於(yu) 確定任何分子的甲基化狀態的所有先前的基於(yu) 亞(ya) 硫酸氫鹽的方法都存在缺點。迄今使用的常規亞(ya) 硫酸氫鹽處理導致起始損失84％至96％[3]，需要限製性內(nei) 切核酸酶消化，長時間的孵育，將包埋在瓊脂糖中，多管變化和/或多個(ge) 純化步驟。

該MethylEasy ™技術解決(jue) 了所有以前的亞(ya) 硫酸氫鹽療法的缺點，並具有許多優(you) 點，包括：

  • 快速簡便的使用 - *轉化的純化總轉換時間為90分鍾
  • 沒有預處理
  • 幾乎不會丟失
  • 提高靈敏度
  • 放大效率更高
  • 更長的片段生成和
  • 增加模板的穩定性（室溫超過一個月）

[1] Frommer，M.，et。Proc.Nat.Acad.Sci.USA，1992,89,1827-1831。
[2] Hayatsu，H.，Wataya，Y.，Kai，K.，＆Iida，S.Biochemistry，1970,9,2858-2866 
[3] Grunau，C.，Clark，SJ和Rosenthal，A.Nucleicic Acids Res。2001，29，e65。

 

MethylEasy™研究套件

ME002-1

ME002 - 40個(ge) 反應的滿意度

MethylEasy ™Xceed

MethylEasy ™Xceed是一種快速，超靈敏的亞(ya) 硫酸氫鹽修飾研究試劑盒，用於(yu) 檢測基因中的甲基化模式

MethylEasy ™Xceed由初的亞(ya) 硫酸氫鹽測序方法的開發（1），以提供轉換效率。MethylEasy ™Xceed 的強大功能已經在具有甲基化胞嘧啶單堿基分辨率的裏程碑式論文中得到證明，如在人類基因組中（2）。

常規的亞(ya) 硫酸氫鹽處理導致起始損失84％至96％，需要用限製性核酸內(nei) 切酶消化進行預處理，將包埋在瓊脂糖中，或多次管變化和沉澱。

MethylEasy ™Xceed解決(jue) 了所有這些缺點，並且是一種簡單，靈敏和快速的修飾方法，無需預處理，隻需50 pg起始材料。將降解減少90％以上以獲得真正有代表性的甲基化胞嘧啶分析。

 

MethylEasy™ Xceed

MethylEasy ™Xceed是一種快速，超靈敏的亞(ya) 硫酸氫鹽修飾研究試劑盒，用於(yu) 檢測基因中的甲基化模式

ME002-1

ME002 - 足夠40次反應

  • 易於使用 - 不需要預處理和簡單的柱純化
  • 敏感性 - 從少至50皮克的開始（約8種哺乳動物細胞當量）
  • 快速反應 - 從野生型到*修飾的總共需要90分鍾的處理時間
  • 優異的保存 - 將降解減少90％以上，以獲得真正有代表性的甲基化胞嘧啶分析
  • 更好的轉化 - 在測序分析中沒有發現未轉化的證據
  • 內部控製 - 包括反應信心和產品支持
  • 每個反應的價值很高

英文信息如下：

ProductEasyScreen™ KitMicroorganisms Detected
EB001 & EB001-HTEnteric Bacteria Detection(i) Salmonella spp. 
(ii) Campylobacter spp. 
(iii) Shigella spp. /Enteroinvasive E.coli (EIEC)
(iv) Yersinia enterocolitica. 
(v) toxigenic C. difficile and 
(vi) Listeria monocytogenes
EP001 & EP001-HTEnteric Protozoan Detection(i) Cryptosporidium spp. 
(ii) Giardia intestinalis 
(iii) Dientamoeba fragilis 
(iv) Entamoeba histolytica and 
(v) Blastocystis hominis
EV002 & EV002-HTEnteric Viral Detection(i) Norovirus GI
(ii) Norovirus GII 
(iii) Astrovirus 
(iv) Rotavirus A 
(v) Sapovirus
(vi) Enterovirus
(vii) Bocavirus
(viii) Adenovirus and 
(ix) Adenovirus (40 + 41 only)
CDD001C. difficile DetectionToxigenic C. difficile (targets both tcdA and tcdB)
CDD002C. difficile ReflexHypervirulent C. difficile incl. ribotype 027 & 078 targeting: (i) tcdC gene deletion at position 117, (ii) binary toxin gene (cdtA) and (iii) gyrA gene mutation (fluoroquinolone resistance)

 

 

對於(yu) HT（384孔格式）試劑盒，所有試劑盒都足夠用於(yu) 100RXNs或500RXNs

所有  EasyScreen™  病原體(ti) 檢測試劑盒都可用於(yu) 使用EasyScreen™  樣品處理試劑盒準備的  樣品。

有關(guan) EasyScreen™  工作流程以及與(yu) 核酸提取和實時PCR平台的兼容性的更多信息，  請訪問我們(men) 的  EasyScreen™  工作流程頁麵。

 

Enteric Bacterial Targets

Product #Description
ACD001toxigenic C. difficile Primers and Probe
AEB001Salmonella Primers and Probe
AEB002Campylobacter Primers and Probe
AEB003Shigella spp./Enteroinvasive E.coli (EIEC) Primers and Probe
AEB004Yersinia enterocolitica Primers and Probe
AEB005Listeria monocytogenes Primers and Probe

Enteric Protozoan Targets

Product #Description
AEP001Protozoan Universal Primer Set
AEP002Dientamoeba fragilis Probe
AEP003Blastocystis hominis Probe
AEP004Cryptosporidium Probe
AEP005Giardia intestinalis Probe
AEP006Entamoeba histolytica Probe
AEP007Enterocytozoon bieneusi Primers and Probe
AEP008Encephalitozoon intestinalis Primers and Probe

Enteric Viral Targets

Product #Description
AEV001Norovirus GI Primers and Probe
AEV002Norovirus GII Primers and Probe
AEV003Enterovirus Primers and Probe
AEV004Astrovirus Primers and Probe
AEV005Sapovirus Primers and Probe
AEV016Adenovirus Universal Primers and Probe
AEV007Adenovirus 40/41 Primers and Probe
AEV008Bocavirus Primers and Probe
AEV009Rotavirus A Primers and Probe

Other Targets

Product #Description
AEC00116S Primers and Probe

 

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