Molecular Cloning Laboratories（MCLAB）成立於(yu) 1998年，是為(wei) 生命科學界提供基因組研究耗材和服務的先進者。
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I-5™Hi-Fi HotStart 聚合酶
I-5 Hi-Fi HotStart聚合酶是一種高保真，快速的聚合酶。
名稱 | 貨號 | 描述 |
I-5™Hotstart 聚合酶 | I5HD-100 | 250單位，2.5 U /μl |
I-5™Hotstart 聚合酶 | I5HD-200 | 1,250單位，2.5 U /μl |
I-5™Hotstart 聚合酶 | I5HD-OEM | 任何尺寸 |
概述
I-5 Hi-Fi HotStart聚合酶是一種超快速和高保真的聚合酶。它提供了對困難模板的強大擴增，包括質粒，BACS，基因組和λ。它允許擴增高達8kb的人類基因組和高達21kb的λ。它的擴展速度為(wei) 1 kb / 10-15秒，具體(ti) 取決(jue) 於(yu) 模板類型。這允許用戶通過加速PCR反應來節省時間並提供比菲律宾新利网上娱乐或Pfu更高的保真度。該酶含有HotStart機製，可在酶加熱前使酶失活。這允許用戶在室溫下設置PCR反應而不必擔心引物二聚體(ti) 或非特異性預擴增。
特點
•快速 - 比熱啟動快4倍菲律宾新利网上娱乐
•穩健 - 高抑製劑耐受性
•高產(chan) 量 - 率
•長PCR產(chan) 物
源
大腸杆菌
應用
熱啟動PCR
常規PCR
快速PCR
高通量PCR
基因分型
提供
5X反應緩衝(chong) 液（1ml，含5X MgCl 2 ）
50mM MgCl 2（1ml）（用於(yu) 優(you) 化）
提供（緩衝(chong) 液描述）
20mM Tris-HCl，100mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，200ug / ml BSA，50％甘油，1X穩定劑，pH 8.0 @ 25℃
儲(chu) 存條件
-20ºC
單位定義(yi)
一個(ge) 單位是在72℃下在15分鍾內(nei) 將5nmol dNTP摻入酸不溶性物質中的酶量。
參考
Frey，B。和Suppman，B。（1995）。Biochemica公司。2,34-35。
Chester，N。和Marshak，DR（1993）。分析生物化學。209,284-290。
運輸條件
幹冰
用戶協議
| 25μl反應 | 50μl反應 | 終集中 |
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說明 |
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| 25μl反應 | 50μl反應 | 終集中 |
I-5 5X緩衝(chong) 液 | 5 ul | 10 ul | 1X（見注釋） |
10μM引物A. | 1μl | 2μl | 400μM |
10μM引物B. | 1μl | 2μl | 400μM |
模板 | 如所須 | 如所須 | 看筆記 |
50mM MgCl 2 | 如所須 | 如所須 | 看筆記 |
I-5酶 | 0.5 - 1 ul | 1 - 2 ul |
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水（ddH 2 O） | 高達25μl | 高達50μl |
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熱循環條件 |
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3步PCR |
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步 | 溫度 | 時間 |
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初始變性 | 98℃ | 2分鍾 |
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變性 | 98℃ | 10秒 | 25-35個(ge) 周期 |
退火 | 55°C - 68°C | 10-15秒 |
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延期 | 72℃ | 10-15秒/ kb |
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終延期 | 72℃ | 1-5分鍾 |
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| 4℃下 | 保持 |
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2步PCR（見注釋） |
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步 | 溫度 | 時間 |
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初始變性 | 98℃ | 2分鍾 |
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變性 | 98℃ | 10-15秒 | 25-35個(ge) 周期 |
聯合退火和擴展 | 72℃ | 15-30秒/ kb |
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終延期 | 72℃ | 1-5分鍾 |
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| 4℃下 | 保持 |
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筆記 |
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推薦的模板添加 |
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基因組 | 50-250 ng |
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質粒 | 1PG-在10ng |
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病毒 | 1PG-在10ng |
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Mg 2+ |
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1X I-5 PCR Master Mix 中Mg 2+的終濃度為(wei) 1.5mM |
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根據需要以0.5 mM的增量 添加額外的Mg 2+ |
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建議的終Mg 2+濃度範圍為(wei) 2 mM至4 mM |
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2步PCR |
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當引物T m值> 68°C 時，建議使用2步PCR |
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PCR產(chan) 物/克隆 |
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2X I-5 PCR Master Mix產(chan) 生具有平末端的PCR產(chan) 物 |
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使用本產(chan) 品進行PCR後，建議使用平端克隆 |
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對於(yu) T / A克隆，PCR產(chan) 物應在A加入前純化 |
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部分產(chan) 品：
名稱 | 貨號 | 尺寸 | 濃度 |
大腸杆菌連接酶 | EDLA-100 | 1,000個(ge) 單位 | 10,000 U / ml |
大腸杆菌連接酶 | EDLA-200 | 5,000個(ge) 單位 | 10,000 U / ml |
大腸杆菌連接酶 | EDLA-OEM | 任何尺寸 |
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APE 1 | APE-100 | 3,750 units | 15,000 U/ml |
APE 1 | APE-200 | 15,000 units | 15,000 U/ml |
APE 1 | APE-OEM | Any Size |
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名稱 | 貨號 | 描述 | |||
I-5™2X高保真混色 | I5HM-100 | 100次反應（50μl體(ti) 積） | |||
I-5™2X高保真混色 | I5HM-200 | 500次反應（50μl體(ti) 積） | |||
I-5™2X高保真混色 | I5HM-5000 | 5,000次反應（50μl體(ti) 積） | |||
I-5™2X高保真混色 | I5HM-25K | 25,000次反應（50μl體(ti) 積） | |||
I-5™2X高保真混色 | I5HM-OEM | OEM | |||
名稱 | 貨號 | 描述 | |||
2x BlueStar™PCR Master Mix | BSPM-100 | 100次反應（50μl體(ti) 積） | |||
2x BlueStar™PCR Master Mix | BSPM-200 | 1,000次反應（50μl體(ti) 積） | |||
名稱 | 貨號 | 尺寸 |
Ho菲律宾新利网上娱乐 聚合酶（熱啟動） | HT-200 | 500個(ge) 單位，5 U /μl |
Ho菲律宾新利网上娱乐 聚合酶（熱啟動） | HT-205 | 2,500個(ge) 單位，5 U /μl |
Ho菲律宾新利网上娱乐 聚合酶（熱啟動） | HT-210 | 5,000單位，5 U /μl |
Ho菲律宾新利网上娱乐 聚合酶（熱啟動） | HT-OEM | 任何尺寸 |
名稱 | 貨號 | 描述 |
10 x PBS（磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水） | PBS10-100 | 500毫升 |
10 x PBS（磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水） | PBS10-200 | 1升 |
10 x PBS（磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水） | PBS10-OEM | OEM |
名稱 | 貨號 | 描述 |
I-5™Hi-Fi 聚合酶 | PDP-100 | 250單位，2.5 U /μl |
I-5™Hi-Fi 聚合酶 | PDP-200 | 1,250單位，2.5 U /μl |
I-5™Hi-Fi 聚合酶 | PDP-OEM | 任何尺寸 |
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